关于液相方法学确认的问题

折刺09 · 发表于 2017-9-27 11:06:43

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最近在做三七的方法学确认，药典中是这么规定的

但是我们试过很多柱子，人参皂苷Rg1和人参皂苷Re的分离度一直达不到要求，最多只能达到1.4左右，流速调过，也用处不大
最后我们尝试调整流动相梯度

方案1 药典中的规定

时间（分钟）流动相A（％）流动相B（％）

----------------------------------------

0~12 19 81

12~60 19→36 81→64

----------------------------------------

人参皂苷Rg1,Re的分离度达不到要求，最多只能到1.38

方案2

时间（分钟）流动相A（％）流动相B（％）

----------------------------------------

0~12 18 82

12~60 18→36 82→64

----------------------------------------

人参皂苷Rg1,Re的分离度同方案1，只是所有的峰出峰时间往后推

方案3

时间（分钟）流动相A（％）流动相B（％）

----------------------------------------

0~12 19 81

12~60 19→28 81→72

----------------------------------------

人参皂苷Rg1,Re的分离度可以达到1.5，但是最后一个峰人参皂苷Rb1的出峰时间在60分钟以后了

方案4

时间（分钟）流动相A（％）流动相B（％）

----------------------------------------

0~12 19 81

12~30 19→23 81→77

30~60 23→36 77→64

----------------------------------------

人参皂苷Rg1,Re的分离度可以达到1.5，最后一个峰出峰时间也在50分钟

我想问的是如果我们采用方案4去做实验，这是否就算是改变了药典方法，那就要做验证，而不是做方法确认了？

hywq29 · 发表于 2017-9-27 11:11:47

不建议改药典方法，药典上方法是可以做出来的，我在以前单位做过，不过时间有点久，忘记用的什么柱子了，你自己还是得找找原因...

折刺09 · 发表于 2017-9-27 11:26:05

hywq29 发表于 2017-9-27 11:11
不建议改药典方法，药典上方法是可以做出来的，我在以前单位做过，不过时间有点久，忘记用的什么柱子了，你 ...

可是分离度实在达不到，方法确认进行不下去了，还是说分离度可以适当放宽，人参皂苷Re这个峰检验中是用不到的

天之大 · 发表于 2017-9-27 11:32:48

除了试不同的柱子，你还应该试不同厂家的仪器。

chmail01 · 发表于 2017-9-27 11:40:48

建议换下柱子，药典方法是可以的

折刺09 · 发表于 2017-9-27 11:59:48

天之大发表于 2017-9-27 11:32
除了试不同的柱子，你还应该试不同厂家的仪器。

我们公司就一台液相，这怎么试

折刺09 · 发表于 2017-9-27 13:35:55

chmail01 发表于 2017-9-27 11:40
建议换下柱子，药典方法是可以的

这上面用的色谱柱就是

安捷伦（Agilent）

4.6×150mm，5μm

ZORBAX SB-C18

我们借过药检所同一型号的柱子，买了一个新的柱子，分离度都没达到要求，用其他型号的柱子分离度更差，有的人参皂苷Rg1,Re两个峰甚至重合在一起

南瓜南瓜 · 发表于 2017-9-27 14:33:19

按你们就一台液相还能这样去试方法

老夫只吃肉 · 发表于 2017-9-27 15:14:02

理论上是可以做出来的，如果你只有一台仪器的话，你的方法学验证也是做不了的，你现在的条件根本坐不了验证。

zbcjy · 发表于 2017-9-27 15:39:15

药典上没写人参皂苷Re啊？为什么用这个考察分离度呢？

折刺09 · 发表于 2017-9-27 15:52:04

zbcjy 发表于 2017-9-27 15:39
药典上没写人参皂苷Re啊？为什么用这个考察分离度呢？

人参皂苷Re就在人参皂苷Rg1边上啊，分离度不是对两边都有要求

折刺09 · 发表于 2017-9-27 15:55:45

老夫只吃肉发表于 2017-9-27 15:14
理论上是可以做出来的，如果你只有一台仪器的话，你的方法学验证也是做不了的，你现在的条件根本坐不了验证 ...

一台机器做不了方法学确认？这是为什么

苦涩de咖啡 · 发表于 2017-9-27 19:30:31

药典的方法没有问题，不建议你更改，你可以多试试不同的柱子，或者让色谱柱供应商帮你筛选一下适合检测皂苷类的柱子，我用过岛津ODS-2和ES的柱子检测没有问题。

老夫只吃肉 · 发表于 2017-9-28 09:57:08

折刺09 发表于 2017-9-27 15:55
一台机器做不了方法学确认？这是为什么

方法学验证中，不同设备，不同环境，你这么做？

zbcjy · 发表于 2017-9-28 15:25:15

老夫只吃肉发表于 2017-9-28 09:57
方法学验证中，不同设备，不同环境，你这么做？

如果只有一台液相，应该可以只考查不同人员、不同时间吧？毕竟不能为了验证方法而另购入一台液相吧？