荆芥穗中药饮片薄层鉴别求指教

Trocy-zizi

         现在有个关于薄层的问题想咨询一下各位[皱眉]
        不知道有没有做过荆芥穗薄层鉴定的同僚呢，按2015版中国药典做的饮片鉴别。
         对照品用的是胡薄荷酮（201606），对照药材是荆芥穗（201505），展开剂是石油醚（60-90）—乙酸乙酯（37:3）。温度28℃，湿度62，均做30分钟预饱和。
         做薄层的时候，样品和对照药材都做不出对照品的点（相应位置相同颜色的点）。且同样位置对应过去，样品溶液有某成分拖尾，但颜色和胡薄荷酮不一样；而对照药材基本无颜色。
        疑似①样品溶液浓度过高（药典要求3ul），但做实验时用过3ul（第一幅图左一），2ul、1ul（第二幅图左一二），某些不知名成分都有或多或少的拖尾现象。
         或是②对照药材（201505）或样品（2017批次）储存有点久，挥发油较少。但是液相测定样品含量是合格的，对照药材没做。
        或是③药典展开剂问题，我改变配比为石油醚（60-90）—乙酸乙酯—冰醋酸（15:1:0.5），同时加大对照药材量和条状点样，其分离度增加，但依然无点（第二幅图）。久置，薄层板变色，此时样品溶液下方位置和胡薄荷酮显示相同的颜色（第三幅图）。
        或是④全部点样量过大，导致胡薄荷酮残留在原点？我稀释样品4倍（为药典要求的4倍），点样量6ul（为药典要求的2倍），且当总体稀释了2倍（第四幅图的右一二）。对照药材按药典量（10ul）和加大一倍量（第四幅图的左一二），第三次点板，依然无法出点。是还需要继续稀释吗？
        所以想问问各位有没有做荆芥穗相关薄层的经验，最好也是GMP实验室经验，可供交流学习[抱拳]
        急求。

补充内容 (2019-7-18 19:56):
补充实验条件：
①TLC板为青岛海洋化工的硅胶G（100*100）预制板，经105℃活化半小时，置干燥缸中冷却
②点样方式均为手工点样。图1图2用的是5μl的毛细管，图4图5用的均是2μl的毛细管
③图1~4均为短暂性热风吹干

Trocy-zizi

本贴图片均原创，请勿盗取（虽然本来就不成功和丑极了）

Trocy-zizi

图5如示，样品已稀释4倍量，对照药材浓度不变。从左往右分别是1μl样品溶液、2μl样品溶液、4μl样品溶液、4μl对照品胡薄荷酮、2μl对照药材溶液、5μl对照药材溶液（28℃，70湿度），展开剂为石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯（15:1）。
    样品和对照品溶液因为需要静置过夜，是前天下午快5点才开始做的，要求是时时振摇，我们没有振摇机，所以时时手摇时时超声，断断续续的一个半小时，然后静置过夜。图1是昨天下午做的，图2、3是今天上午做的，4~5是今天下午做的，用的都是同一批溶液。
   
    发现①加了冰醋酸的展开剂其分离效果更好，②展开环境的湿度不宜偏高，③样品溶液依然出现粉色的点，对照药材溶液的点减少或者某因子不拖尾了，④加热显色的时间过长或久置，板子会变色，对照品颜色依然从绿色变为粉红色，但对照药材相应位置仍然无色。
   
    这里又新增了疑惑：对照品的颜色应该是绿色还是粉色？样品溶液出现的的粉色点究竟是其他杂质还是因为分离效果不佳被拖住的胡薄荷酮？这瓶对照药材是过期了吗（现售荆芥穗依然是本批次）？

芝麻糊

没做过荆芥穗。帮顶~

中原麻雀

我做过，和你第一块板有点类似，样品主斑点拖尾，不过我觉得你那板有问题的是对照药材。我是因为胡薄荷酮接近原点的位置有个点才搜搜看的，你的板中对照品也有这个问题。我们算是互相印证吧。

Trocy-zizi

中原麻雀 发表于 2019-8-6 14:07
我做过，和你第一块板有点类似，样品主斑点拖尾，不过我觉得你那板有问题的是对照药材。我是因为胡薄荷酮接 ...

那请问你的板子的对照药材和供试品有没有跑出对照品的点了？

中原麻雀

Trocy-zizi 发表于 2019-8-21 13:27
那请问你的板子的对照药材和供试品有没有跑出对照品的点了？

有的，不过图不能给你看

Trocy-zizi

中原麻雀 发表于 2019-8-21 13:31
有的，不过图不能给你看

那你的操作是按药典操作吗？或者有过什么属于你们技术的变动吗

中原麻雀

Trocy-zizi 发表于 2019-8-21 13:43
那你的操作是按药典操作吗？或者有过什么属于你们技术的变动吗

按药典，没有改动

经年累月

中原麻雀 发表于 2019-9-16 11:05
按药典，没有改动

你好，请问你们的荆芥穗显色剂是怎么配置？喷出来的对照品和对照药材显相同颜色的斑点么？

经年累月

Trocy-zizi 发表于 2019-8-21 13:43
那你的操作是按药典操作吗？或者有过什么属于你们技术的变动吗

楼主，上个月我也在做荆芥穗，和你出现相同的问题。请问你的显色剂是怎么配置的？

Trocy-zizi

经年累月 发表于 2019-10-18 13:30
楼主，上个月我也在做荆芥穗，和你出现相同的问题。请问你的显色剂是怎么配置的？

按一部凡例描述的，溶液的百分比，除另有规定外，系指溶液100ml中含有溶质若干克。所以称取的是0.1g香草醛，加入100ml硫酸，超声溶解，搅拌均匀。

中原麻雀

经年累月 发表于 2019-10-18 13:23
你好，请问你们的荆芥穗显色剂是怎么配置？喷出来的对照品和对照药材显相同颜色的斑点么？

按药典检测，对照颜色较浅，斑点也较圆，样品的主斑点拖尾，颜色较深，但没有出现二者对应不上的情况。有篇广州市所侯惠婵的文献可以看下。

wjzz2006

首先，药典要求用H板，你用了G板，其次样品中都是挥发性成分，你用了热风，用嘴巴吹吹，换微量点样器可以点慢点，再一个展开温度有点高，放在冰箱低温展开试试，也可以点极窄条带增加分离度。

Onlyyou12345

专门还找了药典看看，药典对照品溶解用的石油醚，样品提取只用甲醇，可以考虑用无水甲醇，或新开封的，甲醇开封时间长引湿，浓度会降低，提取的就是极性大的杂质，实在不行可以加入少量乙酸乙酯，首先保证提出对照品，还有可能的话自己制板，买的板子硅胶铺的薄，上样量小，自己铺厚板子上样量大，相对分离度也会好一点

Trocy-zizi

wjzz2006 发表于 2021-2-7 08:52
首先，药典要求用H板，你用了G板，其次样品中都是挥发性成分，你用了热风，用嘴巴吹吹，换微量点样器可以点 ...

2015和2020的药典都是要求硅胶G板上样呀。其实是这个方法不稳定，挺多实验室做不出来的，所以2020年版药典改方法了。液相用的是甲醇提取，2020年版也是用了甲醇。新版本可以做出来了呢，谢谢回答哈

溜溜1234

后面怎么解决