细菌内毒素干扰试验

小羊123 · 发表于 2019-12-30 12:01:26

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各位大神，请教一个问题。最近在做一个弱酸的内毒素干扰试验，要用1.0mol/L的氢氧化钠溶液调节PH值，看了药典，要求为确保所选择的处理方法能有效地排除干扰且不会使内毒素失去活性，要使用预先添加了标准内毒素再经过处理的供试品溶液进行干扰试验，但是先加内毒素标准品再调PH的话，内毒素标准品就已经被酸给破坏了。自己在网上查了一下，说干扰试验还是要调PH再加内毒素标准品，但是要做一个影响因素试验，证明用来调节PH的溶液无干扰作用，这个具体要怎么做呀？有没有懂的大神，帮忙指导一下！！！

z_lingtian · 发表于 2020-1-2 14:36:06

标准是3EU/ml的话，完全可以用内毒素专用的Tris-buffer（内毒素小于0.03EU/ml）将样品稀释后再进行干扰试验啊。
不放心的话就用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂，那样品需要稀释的倍数应该足够大了吧。其实用0.25EU/ml的鲎试剂，用buffer稀释12倍，感觉pH应该也上去了吧，可以先测一下pH，在6~8范围内基本应该没什么问题的。

z_lingtian · 发表于 2019-12-30 13:41:49

你们产品的pH多少？为什么要用这么浓的氢氧化钠稀释？我们有一个产品pH4.0，直接用Tris Buffer（内毒素小于0.03EU/ml）稀释4倍后做的。

小羊123 · 发表于 2019-12-30 16:58:19

z_lingtian 发表于 2019-12-30 13:41
你们产品的pH多少？为什么要用这么浓的氢氧化钠稀释？我们有一个产品pH4.0，直接用Tris Buffer（内毒素小于 ...

我们的产品ph为3，限值为3eu/ml

小羊123 · 发表于 2019-12-30 16:59:24

小羊123 发表于 2019-12-30 16:58
我们的产品ph为3，限值为3eu/ml

不能用这么浓的浓度

小羊123 · 发表于 2019-12-30 17:00:38

小羊123 发表于 2019-12-30 16:59
不能用这么浓的浓度

不能用这么浓的浓度吗？

小羊123 · 发表于 2020-1-2 19:56:27

z_lingtian 发表于 2020-1-2 14:36
标准是3EU/ml的话，完全可以用内毒素专用的Tris-buffer（内毒素小于0.03EU/ml）将样品稀释后再进行干扰试验 ...

不行的，也用了0.1mol/L的氢氧化钠溶液调过，完全超过了鲎试剂对应的稀释倍数，所以才用的1mol/L的

z_lingtian · 发表于 2020-1-3 08:58:31

不好意思，想再确认一下，你们这个产品是水溶液吗？
举个例子，0.1mol/L的醋酸溶液，pH接近3，用同体积0.1mol/L氢氧化钠溶液对半稀释，结果溶液肯定就偏碱性了。
所以你说用0.1mol/L氢氧化钠溶液稀释你们样品超过鲎试剂对应的稀释倍数，我不是很能理解。

相反，如果不是水溶液，那如果产品本身就有抑制内毒素的作用，是不是就不用做内毒素了？

z_lingtian · 发表于 2020-1-6 13:33:34

再分享一个吧，不知道能不能帮到你。
我们之前有一个产品是非水溶剂，最大稀释倍数下仍有干扰（阳性无法凝结），后来发现把反应温度提高到37.6℃及以上时，阳性可以凝结了，所以就把反应温度限制在37.6~38.0℃了。至于pH，因为是非水溶剂，就不考虑了，因为调节pH的最终目的也是为了消除干扰。

时间煮雨12 · 发表于 2020-1-6 13:42:28

鲎试剂厂家一般有调节pH的缓冲液，可以试试

小羊123 · 发表于 2020-1-6 15:29:47

z_lingtian 发表于 2020-1-6 13:33
再分享一个吧，不知道能不能帮到你。
我们之前有一个产品是非水溶剂，最大稀释倍数下仍有干扰（阳性无法凝 ...

好的，谢谢

mwp58403 · 发表于 2020-1-6 15:40:37

那个药典教你要“先加内毒素标准品再调PH”，来来来，拖出来打死。

小羊123 · 发表于 2020-1-6 15:40:39

时间煮雨12 发表于 2020-1-6 13:42
鲎试剂厂家一般有调节pH的缓冲液，可以试试

你们有没有用过酸或者碱溶液调节PH值呢？要怎么证明所加溶液不会使内毒素失活？按照药典的要求，先加内毒素再经过中和处理的话，内毒素就失活了。

时间煮雨12 · 发表于 2020-1-6 15:54:58

小羊123 发表于 2020-1-6 15:40
你们有没有用过酸或者碱溶液调节PH值呢？要怎么证明所加溶液不会使内毒素失活？按照药典的要求，先加内毒 ...

我个人是没有做过调节pH的样品处理的，我个人的理解是，凝胶法对于供试品的pH有范围要求，那么理论上是应该将调节好pH的供试品进行细菌内毒素检测方法学验证，如果调节好pH的供试品能满足干扰初筛试验、干扰试验就应该是符合细菌内毒素检测无干扰的要求的。当然，如果你确实觉得无从下手，建议咨询鲎试剂厂家，我当时建立内毒素检测方法的时候，湛江安度斯的技术人员给我了很大的支持，推荐。

小羊123 · 发表于 2020-1-6 16:28:45

时间煮雨12 发表于 2020-1-6 15:54
我个人是没有做过调节pH的样品处理的，我个人的理解是，凝胶法对于供试品的pH有范围要求，那么理论上是应 ...

好的，非常感谢。。。

牙白YABAI1 · 发表于 2020-2-29 20:50:16

楼主弱酸的内毒素做出来了吗，最近也在探索弱酸的细菌内毒素，稀释剂的选择有些困难

'睡午觉的咸鱼 · 发表于 2020-4-8 20:15:10

这个咨询一下湛江安度斯，专业

刘小懒、 · 发表于 2021-8-17 08:30:37

请问一下楼主解决了吗？

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