离子色谱-脉冲安培法测定三羟甲基氨基甲烷（Tris）含量

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三羟甲基氨基甲烷（Tris），又名氨基丁三醇，生产过程中常用于调节酸碱平衡，生物化学和分子生物实验中缓冲液的制备，医药中间体等，目前检测Tris的主要方法有分光光度法、高效液相色谱法、离子色谱-电导检测器法等。但一些药物产品中含有蛋白质甘氨酸钠离子等辅料的情况下，测定Tris使用上述方法就会有干扰因素操作复杂等问题出现。微源检测实验室利用实验室条件，查阅文献资料试验了离子色谱-脉冲安培测定法并验证了方法的专属性、线性、及准确性。

精密称取三羟甲基氨基甲烷（Tris）100mg置于容量瓶中，用蒸馏水溶解混匀后定容，将三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液浓度调整至10mmol／L。再精密吸取100、200、400、600、800μL分别置于100mL容量瓶中，用蒸馏水溶解混匀后定容，配制成0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mmol／L的三羟甲基氨基甲烷（Tris）对照品溶液。这里的供试品以冻干人凝血酶（Thrombin）为例。供试品Thrombin溶液按照标示注射用水复溶。供试品人凝血因子Ⅷ溶液按照标示注射用水复溶，此溶液含约的甘氨酸、钠离子、蛋白质及其他物质。

色谱柱	IonpacCS16（5mm×250mm）
淋洗液	40mmol／LMSA，流速；1.0mL／min
	500mmol／L氢氧化钠；流速：0.3mL／min
柱温	30℃

专属性：取0.01mmol／L的三羟甲基氨基甲烷（Tris）对照品溶液、供试品人凝血因子Ⅷ溶液（经稀释）及供试品Thrombin溶液（经稀释），按照表格色谱条件进样检测，色谱图如下所示：

线性范围：取0.01、0.02、0.04、0.06、0.08mmol／L的三羟甲基氨基甲烷（Tris）对照品溶液，以Tris对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，表格所示色谱条件分别进样测定检测结果表明，Tris的保留时间为6.0min，相关系数（R2）>0.99。利用离子色谱-脉冲安培法进行的专属性、线性验证，得出结论为该方法检测三羟甲基氨基甲烷含量，供试品中甘氨酸、钠离子等物质对Tris的测定没有过程干扰，专属性好，呈现出良好的线性关系，可用做三羟甲基氨基甲烷（Tris）含量测定的方法。