无菌及微生物限度问题

Magic杨123

我们最近在做一些结构复杂的一次性塑料医疗器械微生物负载，微生物采集方法选择上有难题，因为我们结构比较多，有长管，有不锈钢针还有结构复杂的底座什么的
可以整件剪开放具塞三角瓶一起做么（然后钢针可能剪不开）？大概质量在10g以内

我现在才刚准备做这个，很多事情都没有经验，有好多问题希望大神帮我解答，或其他参考方法。
问题一  按我描述的做法采集微生物是不是可行，但是不锈钢针不好剪断又有点长（10+cm)，内径也小0.20mm左右；如果选择SIP，这种结构复杂，材料不同，又不均一的，我不知道该怎么做
问题二  问题二就是就是如果我产品假如微生物负载不高的话，我该怎么给我的产品部分添加已知数量的微生物用于采集方法的验证
问题三  培养基计数方法适用性试验，往供试液添加＜100cfu微生物，我该怎么计数？薄膜过滤法供试液是不是我用于问题一的洗脱液（比如我用100ml洗脱液洗脱我的待测产品）？
问题四  用TSA和SDA培养的结果，TSA是不是用一件产品洗脱薄膜过滤培养，SDA也用一件产品洗脱薄膜过滤培养，那我的生物负载岂不是两件产品结果？
问题五 微生物质量检测有没有对离心机和显微镜有什么具体要求，大致配置，然后有没有需要其他仪器（微生物限度仪和集菌仪已买）
敬请各位大神回复

james175cm

1.所描述的是医疗器械产品做微生物限度，不是无菌检查，后面你说SIP，这个指的是在线灭菌吗？这个是生产设备上的，所以没太明白你这里的SIP指的是什么。就产品微生物限度检查而言，既然有这个要求，必定有产品的外包装，那么就不用把微生物检查搞得太复杂（取出来剪开实际上忽略了包装袋内壁）。剪开外包装，用一定量（根据产品大小定）的无菌生理盐水或者无菌缓冲液倒进包装内，进行洗脱。取洗脱液进行检查，比如取1ml涂布，或者倾注，或者取合适的量用薄膜过滤法。
2.方法验证，不要局限于采集方法验证上面，我们对于这种洗脱方法是认可的，如果有洗脱不到的顾虑，建议在包装袋内剪开产品。主要关注产品有没有抑菌性，从这个角度出发，方法验证实验组的菌液直接加在洗脱液里即可。
3.菌液的制备是前期验证过的，按经验来说钩一环一般稀释7、8个数量级，能到不大于100cfu/ml；供试液就是洗脱液。
4.两种培养基是检查同一个产品不同的菌种，结果是合并的，洗脱液有多的都用不完的（按你描述的产品洗脱液起码要300ml以上）。
5.微生物检查一般不会用到离心机，某些产品内毒素检查会用到，按照方法转速要求是多少就购买匹配的就行，一般不会用到冷冻。显微镜一般革兰染色鉴别用，放大一百倍一般的光学显微镜即可。微生物检查其他仪器设备的话，可能就是灭菌设备，培养设备，其他就是一些耗材。很久没有做微生物了，不一定全面，你按照方法做自然就知道有哪些设备了。

Magic杨123

1.我这个是要做灭菌验证（灭菌是委外的）前的初始污染菌测试，首先我们得产品结构比较复杂，还有内腔，直接用包装袋洗脱恐怕效果不理想（而且容易二次污染），不过包装袋内壁确实没考虑到（特别是后续还要做无菌检测）
2.我也想直接加菌液到洗脱液中，可是怎么按GBT19973.1-2015,如果产品初始污染菌处于较低水平时，做回收率试验时，需要在结构上添加已知数量得需氧菌芽孢，再进行试验
3 好的 请问环选择什么规格得
4 我用薄膜过滤，平皿上敷贴薄膜滤纸培养
5 好的
6 GBT19973.1-2015还对厌氧菌进行了描述，那我做医疗器械是不是在药典基础上进行厌氧菌计数

13063113060

YY-T 0681.10-2011 用ASTM F 1608-00无菌医疗器械包装试验方法 第10部分 透气包装材料微生物屏障分等试验看下这个可以吗

Magic杨123

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Magic杨123

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