蛋白含量测定，你在用什么方法？

张寅 · 发表于 2022-6-14 12:18:45

根据中国药典第四部，0731 蛋白质含量测定法中提供了6种测定蛋白质含量的方法
各位老师都在使用什么方法来测定蛋白含量呢？
在实际操作过程中，碰到过什么问题吗，觉得哪种方法更好呢？

入不了门者 · 发表于 2022-6-14 13:50:56

当然是根据使用目的和限制条件来选择

曦水蓝天 · 发表于 2022-6-15 11:08:23

请问各位如果采用消光系数法测蛋白含量，消光系数是否需要测定或验证呢

jianing4233312 · 发表于 2022-6-15 11:30:31

这个综合考虑吧，满足你的需求就行

张寅 · 发表于 2022-6-16 09:42:48

曦水蓝天发表于 2022-6-15 11:08
请问各位如果采用消光系数法测蛋白含量，消光系数是否需要测定或验证呢

这个问题好，我们是找第三方测了一下，然后和理论消光系数比较下，差别不大，就使用测定的那个数值，是否要验证，怎么验证，要再想想，或者看看有没有老师解答下

张寅 · 发表于 2022-6-16 09:55:07

入不了门者发表于 2022-6-14 13:50
当然是根据使用目的和限制条件来选择

我们目前是使用lowry，UV，HPLC-SEC外标法来测定蛋白含量
lowry用于中控样品，HPLC用来做成品放行
但是觉得lowry受到干扰比较多，又想改用逻辑更简单的UV来测
而HPLC的标准品又是送第三方用凯氏定氮的方法标定的，却发现，同样的样品，凯氏定氮测下来的数值还不一样。
所以各个方法原理不同，测下来的蛋白含量就不同，就挺纠结的，不知道选用哪个好，想更了解了解，哪个方法更稳定更靠谱。

入不了门者 · 发表于 2022-6-17 15:26:48

张寅发表于 2022-6-16 09:55
我们目前是使用lowry，UV，HPLC-SEC外标法来测定蛋白含量
lowry用于中控样品，HPLC用来做成品放行
但是 ...

lowry法容易受干扰，首选应该是紫外，简单、快速、经济，能用尽量用紫外。对于HPLC标准品的标定，标准品来源可不可靠，是否均匀？定氮法操作要求较高，第三方可不可靠？另外定的是N，不是蛋白质，干扰因素也多，可以用中检院的标准品测试一下第三方的可靠性。另外对于不同的方法，可以做个比较实验，很容易看出问题

医药暴徒 · 发表于 2022-8-9 16:45:13

入不了门者发表于 2022-6-14 13:50
当然是根据使用目的和限制条件来选择

问一下，UV法是不是根据比尔-朗伯定律A=kbc算的浓度

医药暴徒 · 发表于 2022-8-9 16:46:00

张寅发表于 2022-6-16 09:55
我们目前是使用lowry，UV，HPLC-SEC外标法来测定蛋白含量
lowry用于中控样品，HPLC用来做成品放行
但是 ...

问一下，UV法是不是根据比尔-朗伯定律A=kbc算的浓度

张寅 · 发表于 2022-8-9 17:38:27

医药暴徒发表于 2022-8-9 16:46
问一下，UV法是不是根据比尔-朗伯定律A=kbc算的浓度

是的

曦水蓝天 · 发表于 2022-12-8 14:05:14

想问一下有用RP-HPLC方法测含量的么感觉重现性很差不知道是什么原因

张寅 · 发表于 2022-12-8 16:44:11

曦水蓝天发表于 2022-12-8 14:05
想问一下有用RP-HPLC方法测含量的么感觉重现性很差不知道是什么原因

我们是用SEC-HPLC测含量的，RP重现性时好时不好，感觉在柱子上有残留，然后又不是一直累积的状态。重复6针，前3针峰面积一针比一针大，后三针又差不多了。所以RP每跑一个样都跑一针洗针

newbeer · 发表于 2023-1-10 08:50:53

入不了门者发表于 2022-6-17 15:26
lowry法容易受干扰，首选应该是紫外，简单、快速、经济，能用尽量用紫外。对于HPLC标准品的标定，标准品 ...

老师您好，我是刚进入蛋白分析领域的小白，蛋白纯度，含量，HCP等测定过程中有些疑问，想向您请教，可以加您微信吗

newbeer · 发表于 2023-1-10 08:52:59

我们用的是Nano 600，通过UV法测定的，可以加个微信交流一下吗，我VX：15906670092

曦水蓝天 · 发表于 2023-2-6 11:25:52

张寅发表于 2022-12-8 16:44
我们是用SEC-HPLC测含量的，RP重现性时好时不好，感觉在柱子上有残留，然后又不是一直累积的状态。重复6 ...

孤独的漫游 · 发表于 2023-7-5 16:04:38

选1的，得多老的技术阿。但是很经典。

三只狗俩只猫 · 发表于 2023-7-6 16:18:43

我们的微球不溶于水怎么检测蛋白质残留呢？它是发酵生产的

小药丸ya · 发表于 2023-7-7 16:36:27

怎么没有用SoloVPE法的

？

张寅 · 发表于 2023-7-10 12:45:00

小药丸ya 发表于 2023-7-7 16:36
怎么没有用SoloVPE法的？

哈哈哈，因为药典上没看到

求知学徒 · 发表于 2023-7-11 16:36:52

小药丸ya 发表于 2023-7-7 16:36
怎么没有用SoloVPE法的？

SoloVPE测蛋白含量还是蛮准的

[质量检验] 蛋白含量测定，你在用什么方法？

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