秀才遇到兵，被问到了

zquit

背景略去，对话过程如下：

Q:  蛋白样品称重5mg，BCA浓度换算只有3mg，还有2mg呢？都是杂质吧（仿佛听到了阴险的笑声）
A：BCA含量跟称重能是一回事吗？对不上很正常，但凡有点常识都知道……（解释的时候换位在想，好像也有道理，不是还有2mg去哪里了我说不清楚吗，555~）

哪位大神解一下惑，不甚感激！

Lily_VIP已获得悬赏 10 金币+50 金币

最佳答案

在使用BCA法测定蛋白浓度时，如果出现蛋白样品称重为5mg，但经BCA法测定后得到的浓度换算结果仅为3mg的情况，这表明实际测得的蛋白质量与预期不符，出现了所谓的“丢失”。这种情况可能由以下几个原因造成(仅供参考)： 1. 样品处理损失：在蛋白样品的提取、稀释、转移等预处理过程中，可能会有部分蛋白附着在容器壁上、吸头、滤膜或因挥发、沉淀等原因导致损失，并没有全部转移到测定体系中。 2. 测定误差：BCA法虽然是一种常用的蛋白浓度测定方法，但其准确性也会受到多种因素的影响，包括但不限于标准曲线的线性范围、操作过程中的精度、试剂的稳定性、仪器读数的准确性等。如果标准曲线的拟合不佳或者读数有误，都可能导致计算出的蛋白浓度不准确。 3. 样品成分干扰：样品中可能存在的还原剂、去污剂、盐分、金属离子或其他杂质可能会影响BCA试剂与蛋白的显色反应，导致测定结果偏低。 4. 蛋白降解：如果样品在处理或储存过程中蛋白发生了降解，实际可检测到的完整蛋白分子数量减少，也会使得测定结果低于实际加入的蛋白质量。 5. 稀释比例错误：如果在稀释样品时计算错误或操作失误，导致实际稀释比例与预期不符，也会引起测定结果的偏差。 针对这种情况，可以采取的措施包括：重新检查并优化实验操作步骤，确保所有操作精确无误；确认样品处理过程中是否有可能的损失并尽量减少；检查标准曲线是否在测定范围内且线性良好；考虑样品是否存在干扰物质并采取相应措施去除；必要时，可以尝试其他蛋白浓度测定方法（如 Bradford 法、Lowry 法等）进行比对验证。

• Lily_VIP
• 发表于2024-06-12
• 详细答案 >

沉默是输

不懂装懂，抢答一波：老师您说得对！但是我们质控蛋白浓度50%以上合格！

dengjianyyy

这不是很正常吗？2mg就是其他的成分啊，比如说是水，是不是杂质就不清楚了。

Lily_VIP

在使用BCA法测定蛋白浓度时，如果出现蛋白样品称重为5mg，但经BCA法测定后得到的浓度换算结果仅为3mg的情况，这表明实际测得的蛋白质量与预期不符，出现了所谓的“丢失”。这种情况可能由以下几个原因造成(仅供参考)：
1. 样品处理损失：在蛋白样品的提取、稀释、转移等预处理过程中，可能会有部分蛋白附着在容器壁上、吸头、滤膜或因挥发、沉淀等原因导致损失，并没有全部转移到测定体系中。
2. 测定误差：BCA法虽然是一种常用的蛋白浓度测定方法，但其准确性也会受到多种因素的影响，包括但不限于标准曲线的线性范围、操作过程中的精度、试剂的稳定性、仪器读数的准确性等。如果标准曲线的拟合不佳或者读数有误，都可能导致计算出的蛋白浓度不准确。
3. 样品成分干扰：样品中可能存在的还原剂、去污剂、盐分、金属离子或其他杂质可能会影响BCA试剂与蛋白的显色反应，导致测定结果偏低。
4. 蛋白降解：如果样品在处理或储存过程中蛋白发生了降解，实际可检测到的完整蛋白分子数量减少，也会使得测定结果低于实际加入的蛋白质量。
5. 稀释比例错误：如果在稀释样品时计算错误或操作失误，导致实际稀释比例与预期不符，也会引起测定结果的偏差。
针对这种情况，可以采取的措施包括：重新检查并优化实验操作步骤，确保所有操作精确无误；确认样品处理过程中是否有可能的损失并尽量减少；检查标准曲线是否在测定范围内且线性良好；考虑样品是否存在干扰物质并采取相应措施去除；必要时，可以尝试其他蛋白浓度测定方法（如 Bradford 法、Lowry 法等）进行比对验证。

毛驴张

BCA测定是组织内总蛋白的量，但是由于细胞类型复杂，你所测定的某一特定蛋白浓度并不准确，也就是说你的灰度值是有问题的，所以你的重量和推测量对不上，其实这事确实是怪做实验的人，毕竟参数没调好，不怨。

逍遥自在005

看不懂，但是感觉很有道理的样子。

PFangxh656797

看不懂，这方面接触少

cloudsky

3楼专业，应该是资深QC。

zquit

感谢各位的回答，特别感谢3楼@Lily_VIP！
查了一下资料，除了方法严谨性外，还可以从其他的角度来进行解释：
1）首先BCA法的原理决定了这只是个间接定量的方法；
2）其次糖基化等也会影响到检测的响应值；
3）不同蛋白的响应值会有差异。
以上不一定完全正确，供各位参考。

参考资料
[1]Fountoulakis, M., Juranville, J. F., & Manneberg, M. (1992) Comparison of the Coomassie brilliant blue, bicinchoninic acid and Lowry quantitation assays, using non-glycosylated and gly cosylated proteins. Journal of Biochemical and Biophysical Methods, 24(3–4), 265–274.
[2]Noble JE, Knight AE, Reason AJ, Di Matola A, Bailey MJ. A comparison of protein quantitation assays for biopharmaceutical applications. Mol Biotechnol. 2007 Oct;37(2):99-111.
[3]https://www.thermofisher.cn/cn/zh/home/references/molecular-probes-the-handbook/protein-detection-and-proteomics-technology/quantitation-and-selective-purification-of-proteins-in-solution.html

Lily_VIP

感谢楼主           

余额吥足

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