微生物菌种

种花家的小团子 · 发表于 2024-7-26 08:56:46

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保存在－20度冷冻的二代铜绿菌种拿出来做传代，结果培养没有菌生长，是不是可能说明二代菌种已经没有用了。

种花家的小团子 · 发表于 2024-7-26 09:01:37

二代菌种是22年做的，到现在应该快两年了，冷冻的温度没有一直是-20℃，一般情况下是－10℃~－30℃之间波动。

flakesnow97 · 发表于 2024-7-26 09:06:51

可能是保护剂没有用好，菌种在-20度的时候不是瞬时冷冻，冰晶体将细菌细胞穿破而死亡。

种花家的小团子 · 发表于 2024-7-26 09:09:25

flakesnow97 发表于 2024-7-26 09:06
可能是保护剂没有用好，菌种在-20度的时候不是瞬时冷冻，冰晶体将细菌细胞穿破而死亡。

有加15%甘油的，之前拿出来的培养都可以，现在的拿出来做了两次了都没有长。那除了15%的甘油，还有什么可以做保护剂吗？

（、 · 发表于 2024-7-26 09:10:38

不知道，不过应该死了。学习下。

八档丶电风扇 · 发表于 2024-7-26 09:15:11

时间太长了、温度不够低，甘油冻存管要长期保存，起码要-30℃以下，最好在-70℃以下，-20左右也就顶多存个1-2年

甘油冻存管的制备最好是40%浓度和菌悬液1:1混合，制备成20%甘油的冻存管、这样保存效果会好一点

种花家的小团子 · 发表于 2024-7-26 09:38:54

八档丶电风扇发表于 2024-7-26 09:15
时间太长了、温度不够低，甘油冻存管要长期保存，起码要-30℃以下，最好在-70℃以下，-20左右也就顶多存个1 ...

好的，谢谢。

13063113060 · 发表于 2024-7-26 09:49:45

铜绿是不是要常温保存啊

咒逐 · 发表于 2024-7-26 11:11:00

13063113060 发表于 2024-7-26 09:49
铜绿是不是要常温保存啊

活菌是，低温会引发自溶，休眠菌就和其它细菌一样了。

咒逐 · 发表于 2024-7-26 11:20:40

本帖最后由咒逐于 2024-7-26 11:24 编辑

除了6楼朋友说的问题，有几个点需要关注一下，

是否有复冻？冻存休眠菌通常不允许复冻，菌数比首次冻掉的厉害的多
转接是取全液、1ml、还是接种环？接种环会因为取量太少失效
制备菌种是从菌原液开始，还是稀释液、或者菌苔拌匀？最好如6楼朋友说，用菌原液（二代应该是复壮液）制备，尽量保证菌数尽可能多可以极大增加转接时成功率。
-10~-30℃是什么情况，普通家用冰箱？细菌还是能在-10℃以下保持低水平活性的，我们测试结果生理盐水配制甘油冻存液效果不如蛋白胨水甘油冻存液效果好，可能是提供了一些营养，或者化冻期间提前完成了复苏。

另外，转接是直接取冻存菌划线斜面吗？是否存在复壮后接种？也就是菌种化冻后有没有通过如TSB之类的增殖后再划线？二代传出来复壮一代（3）再接种（4）还是来得及的，菌活性也更好。

（、 · 发表于 2024-7-26 14:24:07

咒逐发表于 2024-7-26 11:20
除了6楼朋友说的问题，有几个点需要关注一下，

是否有复冻？冻存休眠菌通常不允许复冻，菌数比首次冻掉 ...

有没好的文件，让我们学习一下这种菌种保存，我只会斜面保存。

咒逐 · 发表于 2024-7-26 14:27:43

（、发表于 2024-7-26 14:24
有没好的文件，让我们学习一下这种菌种保存，我只会斜面保存。

我现在手上也没文件啦，办公电脑都换了。这个是资料+工作经验慢慢做出来的。

LGL6055 · 发表于 2024-7-26 16:59:20

铜绿低温会自溶

[无菌&限度检查] 微生物菌种

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