qPCR熔解曲线双峰处理

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大家有遇到过熔解曲线的双峰问题，低浓度模板的出现双峰，而且有的时候有双峰有的时候检测没有，这个大概率是引物二聚体还是其他原因呢，NTC阴性对照是正常的。

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机智鼠

在qPCR实验中，熔解曲线出现双峰通常表明存在非特异性扩增。这种情况可能由多种因素引起，包括但不限于引物二聚体的形成、非特异性产物的生成等。

首先，低浓度模板出现双峰的情况，可能是由于引物二聚体的形成。引物二聚体会在qPCR过程中与模板DNA竞争结合，导致非特异性扩增，从而在熔解曲线上形成额外的峰。此外，如果实验条件不稳定或反应体系中存在杂质，也可能导致熔解曲线出现双峰。

针对这一问题，建议采取以下措施：

1. 优化引物设计，避免引物自身或相互之间的互补序列，减少二聚体的形成。

2. 确保所有试剂和样品的纯度，避免引入外源DNA污染。

3. 调整退火温度和时间，以提高特异性扩增的效率。

4. 如果问题持续存在，建议重新评估实验设计和操作流程，必要时进行方法验证。

总之，在qPCR实验中，熔解曲线的双峰问题需要综合考虑多种可能的原因，并通过实验优化来解决。

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范范aru

NTC正常，考虑引物无明显二聚体，低浓度有双峰，高浓度没有，是每一次都样子还是少数几次低浓度有双峰，少数几次，可能是来源于气溶胶污染，每一次则整个体系中有污染物，随着模板量的增加，非特异性信号逐渐被掩盖。你自行对照解决