液相色谱峰面积重复性差

后春天的诗unv

做液相方法开发用ELSD测聚乙烯亚胺（PEI），进样后进空白，空白有鼓包，厂家建议在进样间可进2%HClO4去除鼓包，但我进了2%HClO4后再进样封面积下降很多，且重复性差，但峰型、分离度、理论踏板等都正常，通过检测别的项目已排除是仪器系统原因，不知道是不是2%HClO4影响了色谱柱，流动相A是20mM甲酸铵，pH3.0，B相是40%乙腈。求助大神。厂家关于柱子的介绍不多，只知道是SEC和IEC混合柱

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可以在进样器之前加一根鬼峰捕集柱试一下，

ALPACA

1. **分析可能的原因**
   - **酸对色谱柱的影响**：2%HClO₄是一种强酸，而你的流动相A是20mM甲酸铵（pH3.0），B相是40%乙腈。引入高浓度的强酸可能会改变色谱柱的化学环境。对于SEC（尺寸排阻色谱）和IEC（离子交换色谱）混合柱，这种酸性物质可能会与柱内的固定相发生化学反应。比如，它可能会改变固定相的离子交换基团的性质或者对尺寸排阻的通道产生影响，导致色谱柱对聚乙烯亚胺（PEI）的保留行为发生变化，从而使峰面积下降和重复性变差。
   - **酸与样品的相互作用**：PEI是一种含有氨基的聚合物，在酸性环境下，氨基可能会发生质子化反应。2%HClO₄的加入可能会使PEI的化学结构和性质发生改变，例如改变其在溶液中的形态或者与其他成分的相互作用方式。这种变化可能会影响PEI在色谱柱中的分离和检测，进而导致峰面积下降和重复性差。

2. **解决方案建议**
   - **冲洗色谱柱**：用流动相充分冲洗色谱柱，以去除之前引入的2%HClO₄。可以延长冲洗时间，确保色谱柱恢复到原来的化学环境。例如，用较低流速（如0.2 - 0.3mL/min）冲洗色谱柱过夜，让流动相重新平衡柱子。
   - **优化空白处理方法**：既然厂家建议的2%HClO₄处理方法出现问题，可以尝试其他空白处理方式。例如，增加空白样品的清洗次数或者改变清洗溶剂。可以考虑使用流动相或者与流动相组成相似的溶剂来清洗进样系统，避免使用可能对色谱柱和样品产生不良影响的强酸。
   - **检查进样系统**：虽然你已经排除了仪器系统原因，但还是需要再次仔细检查进样系统。特别是进样针、进样阀等部件，确保没有残留的2%HClO₄或者其他污染物影响进样和检测。可以对进样系统进行维护，如清洗进样针、更换进样阀的密封垫等。
   - **调整检测条件**：如果峰面积下降和重复性差的问题仍然存在，可以尝试调整检测条件。例如，改变ELSD（蒸发光散射检测器）的参数，如漂移管温度、气体流速等。有时候，合适的检测器参数设置可以改善检测信号的稳定性和重复性。同时，也可以考虑优化色谱条件，如调整流动相的比例或者流速，看是否能改善PEI的分离和检测效果。

后春天的诗unv

说错了，只知道是离子排斥和分子排阻的混合柱

后春天的诗unv

ALPACA 发表于 2024-12-5 14:59
1. **分析可能的原因**
   - **酸对色谱柱的影响**：2%HClO₄是一种强酸，而你的流动相A是20mM甲酸铵 ...

不好意思，说错了，是离子排斥和分子排阻混合柱