初始污染样品的前期处理

yuanwairen · 发表于 2015-7-6 16:34:44

我们公司有一个产品需要做初始污染菌，由于这个产品使用了高粘度的辅料羧甲基淀粉钠，它的特性是不溶于水和油脂类，在水中是吸水溶胀，做初始污染的时候发现1件样品吸收至少130ml的缓冲液，才可以用吸量管吸出。我们的产品又规定了初始污染不大于300CFU/件，请问一下，还有没有更好一点的方法让我的数值更准确一些？我这里想了些思路，第一个是将这130ml都做接种，最后求总和，这个需要时间和平皿太多。第二个寻找缓冲液，但是目前为止我没有找到一种缓冲液是可以的，常用的生理盐水，0.1%的蛋白胨等。第三个思路加热，但是由于温度升高到45度后黏度变化不大。

补充内容 (2015-7-10 11:33):
目前为止，有了2个思路。一个是加入淀粉酶水解，不过遇到了1个问题，淀粉酶的灭菌问题，考虑使用辐照灭菌，不知道会不会影响酶的活性，目前这个正在验证中。；第二个是加大接种量，这个是简单，但也需要做验证。...

youwenmicro · 发表于 2015-7-6 16:34:45

在不影响浑浊度和培养基促生长能力的前提下，可考虑采用直接为15厘米的大平皿测十分之一体积样品，总菌落数不超过30即可。

yhdaizy@163.com · 发表于 2015-7-6 16:45:43

挺专业的，路过看看

klanfang · 发表于 2015-7-6 21:45:29

300CFU/件？

XQW · 发表于 2015-7-6 21:47:09

初始污染不大于300CFU/件是根据什么制定的。

夏风萧雨 · 发表于 2015-7-6 22:33:42

把样品碾碎，取一定量用平皿法做。这样可以吗？

cgycxd · 发表于 2015-7-6 22:36:40

件的定义？感觉这样品类似淀粉，稀释液加入后变成粘稠状。是否可以用薄膜过滤法然后抽真空冲洗，然后集菌在薄膜上，然后培养计数

yuanwairen · 发表于 2015-7-7 09:58:31

XQW 发表于 2015-7-6 21:47
初始污染不大于300CFU/件是根据什么制定的。

产品是辐照灭菌，剂量审核做的是23kgy，根据国标23kgy约等于300CFU/件，所以制定了不超过300cfu/件。

yuanwairen · 发表于 2015-7-7 10:04:15

夏风萧雨发表于 2015-7-6 22:33
把样品碾碎，取一定量用平皿法做。这样可以吗？

您的这个方法，我想过，是否可以将产品加入缓冲液后匀浆，将按照对应的比例来涂布，我不知道对于涂布来讲是否可以使用胶体来涂布，一般使用的是液体，所以我也想问一下各位老师。但是您给的建议直接碾碎可能不成，因为我们的产品吸水性很强，另外这样做的样品不均匀。

yuanwairen · 发表于 2015-7-7 10:09:20

cgycxd 发表于 2015-7-6 22:36
件的定义？感觉这样品类似淀粉，稀释液加入后变成粘稠状。是否可以用薄膜过滤法然后抽真空冲洗，然后集菌在 ...

件的定义是因为我们的SIP=1可以直接做破坏的。做薄膜过滤法对于我们的产品来件不行，菌液的回收率太低，2010版中国药典中有离心这个说法，我使用过这个方法，我们的产品所有的微生物限度都是未检出。若不离心直接抽的话，我们的产品直接是胶体，菌也不生长。

夏风萧雨 · 发表于 2015-7-7 10:24:29

yuanwairen 发表于 2015-7-7 10:04
您的这个方法，我想过，是否可以将产品加入缓冲液后匀浆，将按照对应的比例来涂布，我不知道对于涂布来讲 ...

你的产品能否先用淀粉酶处理一下？使它融于水后黏度降低呢？

MooMooMua · 发表于 2015-7-8 00:29:52

没看懂，我的理解是130毫升就130毫升呀，全部过滤吧。

jiang376 · 发表于 2015-7-8 05:49:41

我觉得的还是用稀释薄膜过滤法来做，至于你说的回收率过低是什么原因？我们想办法改善，是抑制吗，还是膜孔堵塞

yuanwairen · 发表于 2015-7-9 15:44:55

MooMooMua 发表于 2015-7-8 00:29
没看懂，我的理解是130毫升就130毫升呀，全部过滤吧。

过滤不了的，膜孔会堵了，因为是胶体不是液体。

yuanwairen · 发表于 2015-7-9 15:47:06

jiang376 发表于 2015-7-8 05:49
我觉得的还是用稀释薄膜过滤法来做，至于你说的回收率过低是什么原因？我们想办法改善，是抑制吗，还是膜孔 ...

膜会堵，500r/min离心的，基本上都是无菌生长，没有意义。2015版中国药典培训的时候老师也不太赞成离心静置这些方法。

yuanwairen · 发表于 2015-7-10 16:42:19

youwenmicro 发表于 2015-7-10 07:21
在不影响浑浊度和培养基促生长能力的前提下，可考虑采用直接为15厘米的大平皿测十分之一体积样品，总菌落数 ...

非常感谢，这个也是一种相对简单的方法，先做一下验证看看，谢谢。

[无菌&限度检查] 初始污染样品的前期处理

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