语音与课件整理| VHP在制药企业中应用和消毒效果验证

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前 言

甲醛熏蒸对洁净区的杀菌能力已被公认是行之有效的，虽然在现行我国的药典和GMP中还允许使用，但由于它的毒性和灭菌后的残留等问题，寻找可以取代甲醛消毒灭菌的方法，已经刻不容缓。自20世纪80年代，发现了气态比液态的过氧化氢的杀菌能力不仅大于200倍以上，且在气相状态下仅需要较低浓度的过氧化氢即可达到高浓度液态的灭菌能力之后，过氧化氢消毒剂在无菌制药中灭菌的应用越来越广泛。特别是雾化过氧化氢和汽化过氧化氢两种不同状态的气化过氧化氢消毒灭菌技术对洁净室或区的消毒灭菌越来越受重视。现在已被中国、欧盟、美国等国的药典和GMP法规所推荐的在无菌制药中的灭菌技术。

来 源：知药学社 讲 师：宋老师

一、讲师简介

宋老师

知药学社资深社员

1986年参加工作

沈阳药科药科大学在职药事管理研究生

中欧商学院mini-MBA

食品药品高级工程师、注册执业药师

多年来致力于制药行业的GMP和GSP的质量管理工作

二、课堂课件整理

目的：建立在无菌制药工艺中的雾化过氧化氢对A级隔离操作器（RABS或ORABS）和B级灌装洁净室的灭菌以及汽化过氧化氢对洁净传递窗的灭菌，两种状态的气化过氧化氢分别对不同灭菌工艺效果验证方法。

方法：采用嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC12980）作为过氧化氢灭菌生物指示剂(BI)，对两种状态的气化过氧化氢消毒剂不同的灭菌对象均达到灭菌效果的前提下，分别建立过氧化氢灭菌的浓度限度标准。

结论：两种状态的过氧化氢灭菌效果方法经验证，重复性好，可用于气化过氧化氢在无菌制药中灭菌效果的验证，在用过氧化氢灭菌生物指示剂(BI)作为挑战性验证，保证气体过氧化氢的分布均匀和无菌保证水（SAL）平达到6LOG值的前提下，建立过氧化氢灭菌的浓度限度标准，是行之有效的。

生物指示剂简介

据USP32<1035>《BiologicalIndicator For Sterilazation》的概念，生物指示剂（BI）是一类特定微生物经过特定制备方法的生物制品，这些特定微生物比普通的微生物具有更强的耐受性。这些孢子必须附着在滤纸片、沙土、无锈钢片等惰性材料的载体上，并配有相应的培养基，这样得出的验证结果才可靠。目前生物指示剂广泛被用于制药工艺中的灭菌设备（如湿热灭菌、干热灭菌、辐射灭菌等）的验证，在现行(2015版)《中国药典》和(2010版)《药品生产质量管理规范》中有详细的要求。

在2015版《中国药典》和USP仅介绍将嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC12980）作为气化过氧化氢在无菌制药中灭菌效果的生物指示剂，没有规定应用在雾化过氧化氢灭菌效果验证。本文就是建立的两种状态的过氧化氢灭菌效果，在用过氧化氢灭菌生物指示剂(BI)。

雾化过氧化氢的灭菌对象

隔离操作器

指配备B级（ISO 5级）或A级（ISO 4.8级）洁净级别的空气净化装置，并能使内部环境始终与所在的洁净室和操作人员完全隔离的系统。随着GMP法规日趋完善，高污染风险的无菌制药的灌装、自动进出料等关键工艺宜在隔离操作器中完成。隔离操作器的灭菌显得非常重要。

B级灌装洁净室

是在无菌制药的灌装工序中的A级隔离操作器（RABS）所处的B级洁净室相当（ISO 5级）。A级和B级洁净室对微生物（沉降菌和浮游菌）有严格的要求。

由于雾化过氧化氢灭菌法的具有很强的氧化能力，因此无任何毒害、不会形成二次污染，无明显残留物和无腐蚀性。因此采用雾化过氧化氢设备对上述无菌制药的（A+B）洁净区的灭菌是非常重要的。

雾化过氧化氢的灭菌仪器

厂家和型号

设定的灭菌参数

洁净区相对湿度：45～65%；洁净室温度：18～24℃为宜。

过氧化氢的消毒剂：原浓度：30%；配制浓度：10%过氧化氢；

每立方米的消毒剂的体积：1.5 ml；扩散系统：15ml；

灭菌时间：压缩空气的压缩在3～4bar,灭菌时间：120min；

用途：用于A级和B级洁净区的灭菌。

气化过氧化氢的灭菌仪器

厂家和型号

灭菌参数设定为：

预处理时间：5min;

充气时间：15min;

灭菌时间：60min;

通风时间：90min

蒸发皿温度：160℃;

空气温度：26℃

充气时H2O2流量：2.5ml/min;

灭菌时H2O2流量：2ml/min

灭菌时间，灭菌效果；灭菌温度；维护保养成本；

1、排气降解时间短，整个灭菌周期时间短1-1.5小时（排风装置和大腔体自动负压排风装置）；

2、采用干法灭菌，没有双氧水冷凝风险，灭菌效果好；灭菌LOG值可以自动设定，灭菌D值自动计算；

3、干燥进气无耗材，减少维护更换频次，洁净压缩空气进气（低湿低温灭菌，浓度高，灭菌时间短，绝对无冷凝，相对湿度：50%-60%）。

4、自带触媒分解器，能快速排放并无耗材，且易维护；

5、采用通用双氧水耗材30%以上，不同浓度均适用，价格便宜，购买相对方便；

6、温湿度探头和VHP浓度探头(自带加热功能，响应速度快)分开，便于维护和校验，浓度探头选型相对稳定，耐用性较好。

7、灭菌温度控制相对稳定，正在常规腔体灭菌温度温升不超过3℃。

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两种状态的气化过氧化氢异同点

相同点

化学结构相同：俗称双氧水，它的分子是由2个氢原子和2个氧原子构成的。化学式为H2O2。从化学式可看出分子中比水分子中多一个氧原子。

灭菌原理相同：与物品接触时，立即分解生成氧。这种尚未结合成氧分子的氧原子，具有很强的氧化能力，与细菌接触时，能破坏细菌菌体，杀死细菌。

安全性：可以分解成水和氧，因此无任何毒害、不会形成二次污染。

残留物：无明显残留物。

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纳米雾过氧化氢

利用干雾过氧化氢技术，将1.5～3%的过氧化氢雾化为小于1微米的颗粒。此颗粒大小与微生物相当，保证长时间在空气中作布朗运动，保证纳米雾过氧化氢与微生物充分作用，达到灭菌的目的。此灭菌技术的特点不同于雾化和气化过氧化氢的灭菌，此技术，可以使过氧化氢为小于1微米的颗粒，在灭菌过程中在接触物品表面后会产生反弹作用，不会凝结在一起产生大的液滴，而减少对物品的腐蚀作用。不仅适合洁净室的空间灭菌，还适用于密闭系统或设备（传递窗、无菌操作隔离器、生物安全柜等）的灭菌。

甲醛熏蒸对洁净区的杀菌能力已被公认是行之有效的，虽然在现行我国的药典和GMP中还允许使用，但由于它的毒性和灭菌后的残留等问题，寻找可以取代甲醛消毒灭菌的方法，已经刻不容缓。自20世纪80年代，发现了气态比液态的过氧化氢的杀菌能力不仅大于200倍以上，且在气相状态下仅需要较低浓度的过氧化氢即可达到高浓度液态的灭菌能力之后，过氧化氢消毒剂在无菌制药中灭菌的应用越来越广泛。特别是雾化过氧化氢和汽化过氧化氢两种不同状态的气化过氧化氢消毒灭菌技术对洁净室或区的消毒灭菌越来越受重视。现在已被中国、欧盟、美国等国的药典和GMP法规所推荐的在无菌制药中的灭菌技术。

依据中国《药品生产质量管理规范》（2010版）要求，应当按照标准操作规程定期对关键洁净区域，特别是在无菌制药的无菌操作区的A级隔离操作器（RABS）和B级灌装洁净室按时进行灭菌，是降低污染的有利的灭菌犯法。根据“美国注射药物协会”（PDA）第34号技术报告和美国食品药品监督管理局（FDA）的推荐，应用气化过氧化氢对无菌制药领域的关键洁净区进行灭菌，以降低在无菌生产过程中微生物的污染。此外依据GMP要求，还应对传入洁净区的关键物料按照要求进行消毒和灭菌。近几年，随着汽化过氧化氢洁净传递窗对物料、产品、工具等物品跨级别或区域的传递已广泛应用。操作者在低级别区往传递窗内放置物料，待灭菌结束后从高级别区域取出灭菌后的物品。特别是不耐热的已灭菌物料如滴眼剂等的内包材物料，通过气化过氧化氢灭菌传递窗灭菌后进入B级灌装洁净室，来保证无菌工艺的生产。气化过氧化氢技术的原理，是将过氧化氢蒸汽注入洁净传递窗内，过氧化氢会与光或金属离子反应，释放高氧化性的自由基，当氧自由基促使微生物失活，在较短的时间内杀死微生物，达到灭菌效果能快速、安全的对物料表面进行灭菌。不会形成二次污染，无明显残留物和无腐蚀性。此灭菌方法克服了过去洁净传递窗配有紫外线照射消毒效果的缺点，限于紫外线是非穿透性的，仅能对光滑的表面和空气的消毒细菌的繁殖体有效，对芽孢、霉菌的灭菌能力很弱的缺点，不适合用灭菌传递窗的灭菌。

关键词：过氧化氢；A级开放隔离操作器（ORABS或RABS）；洁净传递窗；过氧化氢生物指示剂（BI）；过氧化氢灭菌的浓度限度标准

参考文献：

[1] 中国《药品生产质量管理规范》（2010版）及附录

[2] 中国药典委员会，中华人民共和国药典(2015版)[M]，北京：中国医药科技出版社，2015.

[3] 顾维军，徐禾丰，等，制药工艺的验证[M]，北京：中国质检出版社，2012.

[4] 何国强，陈跃武，马义岭，等，制药工艺验证实施手册[M]，北京：化工出版社，2012.

[5] 中国医学出版社管理中心，中国医学细菌菌种目录(1993版)[M]，北京：北京理文印刷厂出版社，1993.

[6] ISO 14644-1 洁净室和环境控制-第一部分 空气洁净等级

[7] ISO 14644-7 洁净室和环境控制-隔离操作器

[8] USP32<1035>《Biological Indicator ForSterilazation》

结果：两种状态的气化过氧化氢分别对两个关键验证对象，分别进行三次的灭菌循环，在放置的过氧化氢灭菌生物指示剂灭菌后，经培养后均为阴性，证明气化过氧化氢浓度分布均匀和无菌保证水平（SAL）达到6LOG值的前提下，灭菌时间参数定为2小时，雾化过氧化氢对A级隔离操作器（RABS）和B级灌装洁净室灭菌浓度限度为10%H2O2需要1.5 ml/m3, 汽化过氧化氢对洁净传递窗灭菌浓度限度为15%的H2O2需要0.65 ml/m3。

生物指示剂的应用说明

菌种数

2.4×106CFU/不锈钢载体（即每个不锈钢载体中含有约2.4×106的菌）

培养条件

55～60℃培养7天，接种的培养基为胰蛋白胨大豆液体培养基（TSB）

三、PPT

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无敌花露水

BI 必须使用10的6次方菌么，能使用10的3次方菌不？一个是灭菌，一个是消毒。

sygao

这个真是写的太好了，从各个方面进行了论证

来自苹果APP客户端

仗义凌然的蚂蚁

语音在哪？？

xqliu

谢谢提供分享