求助：细菌内毒素供试品阳性对照怎么配制

付付得正

细菌内毒素的供试品阳性怎么配制，怎么加进鲎试剂里，安度斯课件和同事说的不一样，做出来的结果不显阳性，是什么原因呀。

付付得正

z_lingtian 发表于 2020-8-27 12:08
首先你们的样品pH大概是多少？做内毒素试验时是否经过稀释？稀释好的供试溶液pH大概在什么范围？

供试溶 ...

同事的是说法是稀释用最终倍数的供试品去稀释内毒素工作标准品，比如10EU/ml工作标准品取0.1加0.9供试品稀释成1EU/ml，后面稀释也是用供试品，直至稀释至2λ，然后加样的话是供试品、供试品阳性对照液、2λ工作标准品、BET水各加0.1至鲎试剂安瓿瓶中，鲎试剂不提前用BET水溶解。

付付得正

换了人来做供试品阳性也还是显阴性，现在打算测一下纯化水，如果纯化水的供试品阳性对照组能显阳性也能说明是我现在的样品纯在干扰吧

付付得正

z_lingtian 发表于 2020-8-27 12:08
首先你们的样品pH大概是多少？做内毒素试验时是否经过稀释？稀释好的供试溶液pH大概在什么范围？

供试溶 ...

没稀释的液体样品PH值是6.59，稀释后的用试纸测过，也是6左右，应该没问题呀

z_lingtian

首先你们的样品pH大概是多少？做内毒素试验时是否经过稀释？稀释好的供试溶液pH大概在什么范围？

供试溶液pH偏酸或偏碱大概率阳性会凝不起来，这些药典上都有写的。

另外你说的“安度斯课件和同事说的不一样”，是怎么个不一样法？一般就是把供试溶液当做稀释液将内毒素工作标准品稀释到2λ（λ就是所用鲎试剂的灵敏度）浓度作为阳性对照，你们是怎么做的？

至于怎么加到鲎试剂里，就是100ul阳性对照+100ul分装好的鲎试剂，略混一下，注意不要有气泡。

曹建甫

这个问题嘛，1是稀释倍数问题。2是有没有干扰的问题。3是温度问题（前一阵就是，阳性就是不凝，后来发现我们的培养箱温度真的不准，调整好温度，问题解决。）

付付得正

起床致富 发表于 2020-8-27 15:47
你说下你的配置方法啊。供试品阳性可以用4λ标准品+二倍浓度最终样品溶液，一比一稀释得到。

我是拿2倍浓度的供试品和4λ的工作标准品混合制成，直接加进复溶后的鲎试剂中

起床致富

你说下你的配置方法啊。供试品阳性可以用4λ标准品+二倍浓度最终样品溶液，一比一稀释得到。

付付得正

浪费了好多工作标准品和鲎试剂

付付得正

wsx 发表于 2020-8-27 10:22
不显示阳性，说明有干扰，干扰试验没有做？

干扰试验没有做，感觉供试品阳性不凝还是方法和操作手法上的问题，搞不清的话不敢做干扰试验

付付得正

wsx 发表于 2020-8-27 10:22
不显示阳性，说明有干扰，干扰试验没有做？

干扰试验没有做，感觉供试品阳性不凝还是方法和操作手法上的问题，搞不清的话不敢做干扰试验

wsx

不显示阳性，说明有干扰，干扰试验没有做？

付付得正

曹建甫 发表于 2020-8-28 18:25
这个问题嘛，1是稀释倍数问题。2是有没有干扰的问题。3是温度问题（前一阵就是，阳性就是不凝，后来发现我 ...

温度应该没问题，阳性是凝的

依然星期三

先做下干扰试验吧

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白寸衫

干扰成立才能进行样品的检测。

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joshua

付付得正 发表于 2020-8-28 17:59
我是拿2倍浓度的供试品和4λ的工作标准品混合制成，直接加进复溶后的鲎试剂中

你的做法和同事的说法 谈不上哪个是错的，其实从纯数学角度，同事的做法 不会得到100%的样品溶液浓度

基本上应该是样品有干扰作用

付付得正

供试品稀释太多倍会不会导致供试品阳性组显阴性呀

z_lingtian

不知道你的问题解决了没有，分享一个过去的经验吧，仅供参考。

我们之前有一个产品，溶剂不是水，在最大有效稀释倍数下阳性也会有时候凝不起来，后来实验发现，恒温槽37.5度以上时阳性才能凝起来，温度低于37.5就是不行。

有时候产品本身有一定干扰是比较讨厌的，需要慢慢摸索条件。

付付得正

z_lingtian 发表于 2020-9-3 16:36
不知道你的问题解决了没有，分享一个过去的经验吧，仅供参考。

我们之前有一个产品，溶剂不是水，在最大 ...

改用了更灵敏的鲎试剂，恒温器的温度设置在37.3度，已经能做出来了

sunxijun

供试品可能有干扰内毒素的东西，可以选择把供试品加进去溶解鲎试剂之后，最后才加标准品内毒素，然后迅速孵育看结果

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