内毒素检测出现假阴性，如何解决？

DR0b577d9b · 发表于 2021-7-30 20:54:23

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供试品阳性对照组出现不凝集，供试品中含柠檬酸，用镁离子缓冲液稀释，选用最高灵敏度鲎试剂，都没解决，请大家帮忙分析一下，还有什么解决方案吗？

飞凌大圣 · 发表于 2021-7-30 23:19:01

有几个问题需要你核实一下：
1、柠檬酸的浓度是多少？
2、样品是什么成份，化学药？中药？还是生物制品？
3、高灵敏度鲎试剂，灵敏度多高？0.03UE/ml，还是0.015EU/ML？
4、使用的BET水含内毒素的限值是多少？
5、你们的产品在哪个阶段呢，研发阶段还是已经生产多年？
6、出现这种情况是第一次，还是一直都这样，只是有时合格有时不合格？
7、建议重新做处方工艺开发，如果可以替换柠檬酸，建议尽量替换掉，不然做细菌内毒素的方法学时，很难做出一个合适的限度的。

能想到的就这些了，你再逐个因素排查一下，祝楼主好运！

joshua · 发表于 2021-7-31 09:59:35

内毒素去除干扰性主要其实就是稀释法；如果用0.03EU 灵敏度的也不行，

可以尝试用光度法，因为他可以做到更低的检测限，对应可稀释的样品浓度也更低，不过光度法成本太高了

懒惰的忙头 · 发表于 2021-7-31 20:19:36

抗干扰做了吗？PH调了吗？稀释倍数提高试试。

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DR0b577d9b · 发表于 2021-8-3 07:07:08

joshua 发表于 2021-07-31 09:59
内毒素去除干扰性主要其实就是稀释法；如果用0.03EU 灵敏度的也不行，

可以尝试用光度法，因为他可以做到更低的检测限，对应可稀释的样品浓度也更低，不过光度法成本太高了

其实我们这个进口标准就是用光度法，只不过我们没有这个仪器，暂时用凝胶法做的，结果确实不行。

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散落的蒲公英 · 发表于 2021-8-5 22:30:03

飞凌大圣发表于 2021-07-30 23:19
有几个问题需要你核实一下：
1、柠檬酸的浓度是多少？
2、样品是什么成份，化学药？中药？还是生物制品？
3、高灵敏度鲎试剂，灵敏度多高？0.03UE/ml，还是0.015EU/ML？
4、使用的BET水含内毒素的限值是多少？
5、你们的产品在哪个阶段呢，研发阶段还是已经生产多年？
6、出现这种情况是第一次，还是一直都这样，只是有时合格有时不合格？
7、建议重新做处方工艺开发，如果可以替换柠檬酸，建议尽量替换掉，不然做细菌内毒素的方法学时，很难做出一个合适的限度的。

能想到的就这些了，你再逐个因素排查一下，祝楼主好运！

还有样品与鲎试剂混合后的ph值是多少，在不在6-8的范围，如果不在可以调节ph

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sunxijun · 发表于 2021-8-9 12:40:50

影响因素有温度、ph和供试品有干扰内毒素凝集的因素。注意孵育过程不要晃动台面，ph有影响可以试试注意ph，测量供试品阳性液体的ph；有干扰作用的话试试调整一下加入顺序，最后加入内毒素标准品孵育试试。如果都不行，可能方法不适用吧

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