菌悬液问题

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1.如金黄色葡萄球菌斜面管1根，稀释7次后，只有一根10ml的菌悬液，并用第7次做了活菌计数，当天使用后，放入冰箱，第二天继续使用，问：这根菌悬液重复会不会污染？是否存在风险嘛？会不会被老师提出质疑？
2.如金黄色葡萄球菌斜面管1根，稀释7次后，做了2根10ml菌悬液，只做了其中一个第7次的活菌计数，当天使用其中一根，第二根放入冰箱，第二天使用，问：是否两根都要做活菌计数？如果不做会不会被老师提出质疑？

小蔷

有一点没明白，放冰箱的是放的甘油管还是稀释后的被记过数的那个无菌试管了？后者这种操作我们日常会这样操作，但其实是不合规的，但是依然会留着在计数之后把余下部分用来做适用性或其他的操作，保存的时间和方式很重要。如果是甘油管不会在重复使用，还是会有污染的风险。

m1213995776

小蔷 发表于 2022-1-17 09:03
有一点没明白，放冰箱的是放的甘油管还是稀释后的被记过数的那个无菌试管了？后者这种操作我们日常会这样操 ...

就稀释后的被记过数的那个无菌试管放冰箱，不加任何东西，放在2-8℃冰箱里，24小时内使用。

11号飞机

1.稀释使用过后的菌悬液，放冰箱，24h内使用，只要操作得当，基本不会有什么污染，但这个会有质疑。不建议，虽然我之前有这么做过。
2.同一根斜面，同时制备多支浓菌液，这样有可能导致各根浓菌液计数结果不一致，影响使用。我目前的做法是一根斜面，只制备一支浓菌液，然后再将这一根浓菌液进行分装（根据使用量分装多少支），取其中一支计数，得到计数结果。之后的使用根据这一支计数结果进行稀释，当然同时也会计数，确保你加入的数量是符合你的要求。

小蔷

m1213995776 发表于 2022-1-17 11:52
就稀释后的被记过数的那个无菌试管放冰箱，不加任何东西，放在2-8℃冰箱里，24小时内使用。

你的这个方法我们偷懒的时候就是这样做的，不体现，我会留最后稀释的2根无菌试管，再根据计数结果确定。因为不同的人在操作中的手法即使是同一瓶菌悬液最后计数结果还是会不一样，所以我觉得直接用计数好的梯度试管没有问题。
如果多支斜面制作的菌悬液，分装甘油管保存，我们任然会在每次使用时分别对取的这支甘油管制作菌悬液计数，得到计数结果在使用。

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11号飞机 发表于 2022-1-17 15:01
1.稀释使用过后的菌悬液，放冰箱，24h内使用，只要操作得当，基本不会有什么污染，但这个会有质疑。不建议 ...

你好，我想问下，按照2020版药典的标准，你们是怎么制备各试验菌株的菌悬液的呢，如何控制在100cfu/ml呢，刚从事这方面不久没啥经验，麻烦指导下，谢谢了

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m1213995776 发表于 2022-1-17 11:52
就稀释后的被记过数的那个无菌试管放冰箱，不加任何东西，放在2-8℃冰箱里，24小时内使用。

你们菌悬液是这样制备的吗
取一环金黄色葡萄球菌斜面培养物，加入10mlTSB培养基中，30-35℃培养18-24h。取1ml金黄色葡萄球菌液体培养物加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，制成10-1菌悬液，按10倍系列稀释至10-7，分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注TSA培养基15-20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。
这里有个问题稀释到10-7次方后进行取样进行培养，培养至少18-24小时，霉菌和酵母菌培养时间更长，那怎么保证是在药典规定的时间内使用呢，还是说先开始进行验证，多做几个梯度，然后多做几次，独立试验，进行确认哪个梯度的菌悬液在100cfu/ml以内，之后开始做生物负载或微生物限度的时候就直接用那个梯度的菌悬液（相当于这里就是凭经验了）进行实验，对于这块有点疑问，望帮我解惑，谢谢！