反相色谱中使蛋白失活的原因是什么？

qq821885840

各位大神，最近学习反相色谱时，不太理解反相色谱中使蛋白失活的原理，求各位帮忙给解答一下。使用乙腈-纯水体系。

bigtiger2019

qq821885840 发表于 2022-3-30 15:40
我想问问是如何失活的？许多蛋白纯化不选择反相层析是因为担心反相层析的生产会导致蛋白质失活，我想问问 ...

兄台，蛋白是水溶性的，反相是水-有机溶剂-填料之间的3相分配，而且为了提高电荷一致性减少拖尾，常常会加TFA把ph搞的很低。其中的任何一个因素都会使蛋白的高级结构折叠方式被打破导致失活啊

晖119683b6

个人建议仅供参考：1、制备样品（含蛋白）过程有没有产生让蛋白质失活的行为：制备样品时有污染、pH调节超过范围、在室温下操作时间过长（根据产品需求，没有在冰面上操作）等。2、检查产品检验前储存情况，例如储存环境（有没有停电没有及时处理）、有没有曾经取出在室温下放置长时间、产品的包装是否完整等。3、检验条件确认：HPLC的检验盘温度有设置适当的温度吗？检验方法里有没有相关的参数对检验产品造成影响（柱温、pH、柱子污染残留等）。

henryizhao

你是问：
1.如何失活？
还是
2.为什么要失活？

qq821885840

henryizhao 发表于 2022-3-1 16:12
你是问：
1.如何失活？
还是

我想问问是如何失活的？许多蛋白纯化不选择反相层析是因为担心反相层析的生产会导致蛋白质失活，我想问问这个反相层析生产到底是如何使蛋白失活的？什么原理呢？谢谢了！

张寅

有机溶剂，pH，应该都会对蛋白产生影响，使蛋白失活吧

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