关于液相色谱出现倒峰的问题

药小新

最近做液相色谱时，发现色谱图在最开始出现了倒峰（1min），查了一下资料，说是进样时，样品对原有流动相产生瞬间阻断，然后瞬间涌流，所以产生先倒后高的“溶剂峰”。问题是，空白（流动相）的溶剂峰比较小，样品的比较大，公司要求比空白大的需要进行积分，这样积分合理吗？出现倒峰的原因是什么，为什么空白和样品不一样？

yuansoul

其实又倒峰很正常的，有时候是溶剂峰，有时候是因为你的进样溶液吸收还没有流动相的高，有的是波动造成的。我原来走的液相有很多倒峰，只要不影响你的物质就没关系，
用了非流动相或者与流动相不同酸度溶剂溶解样品，会出现倒峰现象。可以换个溶剂尝试。

液相色谱是其特点是以液体作为流动相，固定相可以有多种形式，如纸、薄板和填充床等。在色谱技术发展的过程中，为了区分各种方法，根据固定相的形式产生了各自的命名，如纸色谱、薄层色谱和柱液相色谱。

经典液相色谱的流动相是依靠重力缓慢地流过色谱柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。

分离后的样品是被分级收集后再进行分析的，使得经典液相色谱不仅分离效率低、分析速度慢，而且操作也比较复杂。直到20世纪60年代，发展出粒度小于10μm的高效固定相，并使用了高压输液泵和自动记录的检测器，克服了经典液相色谱的缺点，发展成高效液相色谱，也称为高压液相色谱。

yuansoul

公司 说得对，基于 良反应平行线法 的 数据 配对t 检验 对应的“非标准线性回归 中 限定回归，或者 非限定回归”，所以 扣除 空白后 ，如果 出现数据明显差异，需要计算（积分）

Hill301

请问 ，这个空白（流动线）和样品溶剂是一样的吗

药小新

Hill301 发表于 2023-2-3 08:01
请问 ，这个空白（流动线）和样品溶剂是一样的吗

空白就是流动相，样品都是用流动相稀释的，不清楚为什么会这样

药小新

yuansoul 发表于 2023-2-2 09:57
公司 说得对，基于 良反应平行线法 的 数据 配对t 检验 对应的“非标准线性回归 中 限定回归，或者 非限定 ...

嗯，按说是该积分，就是不清楚原因

药小新

yuansoul 发表于 2023-2-2 09:56
其实又倒峰很正常的，有时候是溶剂峰，有时候是因为你的进样溶液吸收还没有流动相的高，有的是波动造成的。 ...

对液相的原理理解不深，不清楚具体原因

米斯特道格

溶剂峰前面的倒峰我倒是没有深究过。不过一般来说溶剂峰都不用积分的呀，对于样品和空白差异的判定是在你样品的目的出峰位置和空白不同需要积分，而不是比他大的地方都要积分。
第二个是我看溶剂峰的峰高不同，一种是你样品的背景实际上是样品里面包含的溶液或者说其他成分和流动相的混合成分，看你样品的稀释倍数大不大，稀释倍数越小的情况下，这种差异就会越发明显，稀释倍数越大的话就越接近于一致，第二个就是进样体积是不是一致的。
一般不太关注这种完全不保留的溶剂峰变化。

Hill301

药小新 发表于 2023-2-3 13:05
空白就是流动相，样品都是用流动相稀释的，不清楚为什么会这样

样品成分中有盐？

药小新

米斯特道格 发表于 2023-2-3 13:37
溶剂峰前面的倒峰我倒是没有深究过。不过一般来说溶剂峰都不用积分的呀，对于样品和空白差异的判定是在你样 ...

对杂质研究不需要关注每个峰，这个是有关物质，就考虑的多点

药小新

Hill301 发表于 2023-2-3 13:42
样品成分中有盐？

样品中有盐存在

Hill301

药小新 发表于 2023-2-3 16:35
样品中有盐存在

那这个峰应该是盐

ygl820

磷酸盐

来自苹果APP客户端

药小新

Hill301 发表于 2023-2-4 07:26
那这个峰应该是盐

这样的盐峰需要积分吗？因为跑过一个品种，对照定位就在倒峰后面，所以公司让倒峰前后的峰都积分。

药小新

ygl820 发表于 2023-2-4 07:55
磷酸盐

磷酸盐会形成这样的倒峰，需要积分处理吗

ygl820

药小新 发表于 2023-2-7 10:48
磷酸盐会形成这样的倒峰，需要积分处理吗

空白里面有？剔除就可以了。

液相色谱柱修复

1min出倒峰不影响的