“CGT每日一问”：Q42 细胞库建立相关文件及遗传稳定性检测

姣妹崽

问题：创建主细胞库时应考虑哪些制造和检定规程？何时需要对细胞库进行遗传稳定性检测？

先通过一些背景介绍来回答第一个问题。生产厂经常创建主细胞库以确保其细胞材料的充足供应，这些细胞库由大量源自产生治疗的细胞系的细胞组成，然后进行冷冻保存。通过冷冻保存，这些细胞系可以基于细胞的稳定性而长期保存，因此无需连续培养以维持原始细胞物质。可创建的细胞库类型有主细胞库和/或各种大小的工作细胞库，具体取决于生产厂的需求。工作细胞库通常源自主细胞库的等分部分，然后可进一步制造成最终药物产品。
在建立这些细胞库时，FDA建议对主细胞库和工作细胞库进行广泛的表征，以确保这些细胞的安全。主细胞库的检定应包括外来因子检查，包括人类传染病因子甚至特定病毒（如果该细胞库的生产中使用了动物源性材料）。外来因子检查应基于PCR方法并检查物种特异性病毒。FDA还建议对主细胞库进行病毒颗粒的透射电子显微镜（TEM，transmission electron microscopy）检查。此外，FDA还要求进行体外和体内外源因子检查，以证明主细胞库中不存在病毒污染物。对工作细胞库，FDA建议申办者进行活力、支原体、鉴别和体外外源因子检查。


对于第二个问题，遗传稳定性检测，FDA通常建议对连续细胞系和基因组编辑细胞的细胞库进行遗传稳定性检测，以确认细胞能够在长期储存条件下保持正常的核型。广泛培养的细胞系通常在细胞扩增过程中积累突变。
尽管FDA没有规定遗传稳定性检测的具体方法类型，但有一些选项可供参考，包括：G显带核型分析（G-band analysis）、遗传指纹图谱分析（genetic fingerprinting,）或其他一些灵敏的方法。无论选择哪种方法，都要求申办方证明该方法的合理性并提供资格信息（qualification information）。FDA还建议说明样本用于染色体核型分析（karyotyping analysis,）的合理性，并为潜在的核型分析偏差设置适当的标准限度。G显带核型分析可一次性进行，以评估生产结束时细胞系的遗传稳定性。
FDA强烈建议在INTERACT或Pre-IND会议时(即首次与FDA沟通)，概述如何创建和维护细胞库，包括检测计划，细胞库的大小（例如，创建了多少瓶以及每瓶可以治疗多少潜在患者），以及到目前为止在产品开发过程中可能已经收集的任何检测结果。这可以使FDA有机会就细胞库是否充足以及在开始受试者研究前是否还进行任何额外检测提供适当的反馈。
最后要强调的是，即使细胞供者满足了21 CFR 1271中概述的供者资格要求，也应对主细胞库和工作细胞库进行检定。细胞库检定应该独立于供者资格检测，仅提供已满足供者资格要求的证据不足以证明细胞库的安全性，需要计划纳入必要的细胞库检定。

吴昊123

Q42呢？好像没见

补充内容 (2023-10-1 13:58):
41，说错了

davidzjy

关于遗传稳定性 比对两国的法规 有这么几个点存在显著差异
1 适用性
个人认为 FDA这个文件里的相对更具有普适性——即使原代细胞本身就携带染色体变异 也可以被接受（因为检测的真正目的是确保基因组的稳定性 而非绝对的正常核型 很多传统工艺建立的永生化细胞系本身就携带大量变异）
而中国药典染色体检查中 统计的对象是“异常染色体细胞数” 因此 严格意义上只要携带任何染色体变异都应被纳入计数
2 检测细胞数&参考标准
FDA的数量要求是100-200 或者对于异质性较强的200以上 但没有给出具体的标准和阈值 需要根据每株细胞的性质来设置标准
而中国药典虽然设定的5种具体的染色体异常项目 并且给出了100、500和1000三种细胞数的cut-off值 但没有详细说明每个标准的适用场合 在实际工作中也造成了不少困惑
BTW 欧洲/英国药典中相关段落的文字明显参考了WHO TRS 978 要求检测200个细胞中与中国药典相同的5种染色体异常 但没有给出明确的cut-off值
3  检测时机/频率
FDA的要求是新建系时和EPOC 而中国药典则是要求每8-12代检测一次 每个连续传代细胞的全周期里至少检测4次 （显然这个标准是针对传统的只能传40-50代的细胞）




补充内容 (2023-10-4 08:52):
最后一点里 忘记说了 中国药典是要求MCB、WCB和EPOC都要做染色体检查

姣妹崽

吴昊123 发表于 2023-10-1 09:34
Q42呢？好像没见

补充内容 (2023-10-1 13:58):

系统bug，本来没准备国庆期间发出来的，41还在草稿箱里

Mya

很棒，感谢分享