求平皿双温培养出处

少爷药师

各位大侠：沉降菌，浮游菌和接触碟采样后平皿培养，先在20～25℃培养箱培养 5天后紧接着在 30～35℃培养箱培养 2天后计数，求这个要求的出处是哪里？

琦瑞福生

WHO           

mopiaoxiang

这个应该出自你们的作业指导书，谁写的问谁去。

药药药140909

《中国药典》指导原则9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则：培养
基一般采用胰酪蛋白胨琼脂培养基 (TSA), 培养温度为30~35℃,时间为3~5天，
必要时可加入适宜的中和剂。当监测结果有疑似真菌或考虑季节因素影响时，可增
加沙氏葡萄糖琼脂培养基 (SDA), 培养温度为20~25℃,时间为5~7天。
USP(2022)<1116> 无菌生产环境的微生物控制和监测 (Microbiological
Control and Monitoring of Aseptic Processing Environments):通常，对于常规微生物生
长培养基(如 SCDM), 培养温度为20~35℃,培养时间不少于72小时。当发现污染
微生物生长缓慢时，可以考虑延长培养时间。上面给出的温度范围不是绝对的。典
型设施环境中常见的嗜温细菌和霉菌通常能够在很宽的温度范围内生长。对于许多
嗜温微生物，能在大约20℃的范围内恢复生长。在没有确凿证据的情况下，微生物
分析人员可能需要针对同一个平板分别在低温和高温下进行培养。需要强调的是，
USP 建议先高温再低温进行培养，理由是先在较低温度下培养可能会损害与人员相
关的革兰阳性球菌的恢复。
美国FDA 《制药微生物手册》(Pharmaceutical Microbiology Manual)(2020版):
、同一个平板在两种温度下进行培养，30~35℃培养2天后，20~25℃再培养5天。
然而，也有一些机构和指南对环境监测平板培养温度有不同的见解。例如
2014年10月在PDAJPharm Sci Technol杂志发表的文章“Comparison of Diferemt
Incubation Conditions for Microbiological Environmental Monitoring”称：单个平板培养
方式(使用TSA 一种培养基，两个温度培养或25~30℃的中间温度培养)也能产生
了总需氧菌计数和霉菌的合理恢复。数据显示霉菌在30~35℃时的恢复率比20~25℃
培养条件下低。而且，如果先进行高温培养将不利于霉菌的恢复生长。
PDA 第13号报告《环境监测计划基础》(Fundamentals of an Ervironmental Monitoring
Program)(2022 版):行业调查显示，大多数公司使用先低温再高温的培养方式。
WHO 疫苗生产设施洁净室的环境监测(2012年11月):环境监测样本应在至少
两种温度下进行培养，在20~25℃培养3~5天，然后在30~35℃培养2~3天。
以上摘要并不代表所有法规和指南，并请注意法规和指南的更新，以最新版本
为准。企业应结合以上指南以及企业自身环境污染菌的主要来源进行评估，制定适
合自身环境监测的培养温度策略。
另外，为避免培养基自身污染而导致洁净区产生污染的情况。建议可以采用湿
热、辐射或其他合适的方式对环境监测用培养基及其包装进行灭菌，尤其是在A、B
级区域使用的培养基。如果使用自己制备的培养基，应在传递到洁净区之前进行预
培养和目视检查没有污染。


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14 环境监测

为了消除抑菌性物质对环境监测样品的干扰，可考虑在培养基中加入中和剂，
常用的中和剂有卵磷脂、聚山梨酯和(或)抗生素酶，具体操作需企业经过方法确
认证明其适用性。