内毒素灵敏度复核

文心雕龙1

先看原文 药典1143：根据鲎试剂灵敏度的标示值(λ)，将细菌内毒素国家标准品或细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15分钟或参照标准品说明书中要求的混匀时间进行操作，然后制成2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均应在旋涡混合器上混匀30秒或参照标准品说明书中要求的混匀时间进行操作。取不同浓度的内毒素标准溶液，分别与等体积(如0.1ml)的鲎试剂溶液混合，每一个内毒素浓度平行做4管。

按药典的说法是先制备2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的内毒素标准溶液，然后与等体积鲎试剂溶液混合，来制备2λ、λ、0.5λ和0.25λ四个浓度管，
但这样操作相当于将内毒素标准溶液稀释了一倍，四个浓度管中内毒素浓度实际是λ、0.5λ、0.25λ和0.125λ，
是不是应该用4λ、2λ、λ和0.5λ的内毒素标准溶液，与等体积鲎试剂溶液混合，这样稀释后正好是2λ、λ、0.5λ和0.25λ，
不知道大家是怎么操作的，应该用哪一种方法？

还有个问题：如果供试品的最大有效稀释倍数是1，那做供试品阳性对照的时候，应该怎么加内毒素标准液（因为无论加多少都会稀释供试品）？

cxj0205

加入后的混合是不算稀释的，这个我咨询过厂家的

zhcm17

1. 2λ标准溶液加入鲎试剂是检验过程，不算稀释；
2. 如果供试品的最大有效稀释倍数是1，那做供试品阳性对照的时候，应该怎么加内毒素标准液？   标准品稀释时直接用供试品代替检查用水

Stars1

是的，只有在进行方法确认的时候才会用4良母打

阿西达卡

最后一步把样品加入鲎试剂不算稀释，所以还是按药典的浓度来，稀释倍数是1的话，样品阳性溶液从工作标准品加1lm水混15分钟后就开始得用样品稀释

散落的蒲公英

zhcm17 发表于 2024-07-16 16:31
1. 2λ标准溶液加入鲎试剂是检验过程，不算稀释；
2. 如果供试品的最大有效稀释倍数是1，那做供试品阳性对照的时候，应该怎么加内毒素标准液？   标准品稀释时直接用供试品代替检查用水

可以用供试品溶液稀释标准品吗，有没有哪里的资料说过呢，纯纯请教

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zhcm17

散落的蒲公英 发表于 2024-7-16 22:58
可以用供试品溶液稀释标准品吗，有没有哪里的资料说过呢，纯纯请教

供试品阳性管要求制备成含有2λ细菌内毒素的供试品溶液，供试品最大有效稀释倍数是1，那就用供试品溶液稀释细菌内毒素标准品，否则配制过程供试品就会被稀释，无法准确排除供试品的干扰。
但是阳性对照使用的标准品要用检查用水稀释

落幕灬

供试品阳性肯定是用供试品来稀释的  不知道你有没有注意到方法干扰试验中有一句话使用的供试品是未检出内毒素的  ，那就是在预实验的时候先摸索出这个倍数 然后进行正式的干扰实验，主要的目的就是证明供试品中的物质没干扰
至于MVD这个检测是针对样品检测来说的 ，要看做这些对照的意义，理解了自然就简单了