HPLC含量主峰出峰后能提有机相比例加快洗脱吗

哨子knn

请教同行：做一个中药，药典方法是盐：甲醇=30：65，没有写明运行时间，主峰10分钟内就出完了，但是甲醇比例太低了，跑50min都没办法全部洗脱，可以在10分钟后提高甲醇比例去加快洗脱吗？最后再加10min平衡回30：65，这样算改变了药典方法要作验证吗？

a72736650

改变洗脱梯度  要做验证

哨子knn

a72736650 发表于 2025-6-21 15:57
改变洗脱梯度  要做验证

即使10min后已经不影响主峰了也算改梯度吗？做一个含量这么久，不考虑下溶液稳定性和检验费用吗

门门

放二十年前，这就随便改就行了，题主的方式也行。
放当今，这样是重大变更妥妥滴！
但是，可以变通嘛，方法就设定15分钟（主峰10分钟，所以足够了），然后采用仪器方法的“后运行”设定，等于运行中啥也没改，就不算改了方法，只要你不说，反正没人懂，所以也没人管。

门门

而且是中药嘛，中药差不多得了，哪有人真管中药咋滴！

门门

哨子knn 发表于 2025-6-21 16:31
即使10min后已经不影响主峰了也算改梯度吗？做一个含量这么久，不考虑下溶液稳定性和检验费用吗

想多了！
GMP文学 怎么可能会管你费用滔天！

哨子knn

门门 发表于 2025-6-21 17:35
放二十年前，这就随便改就行了，题主的方式也行。
放当今，这样是重大变更妥妥滴！
但是，可以变通嘛，方 ...

主要我是报生产，要过GMP，到时应该要抽样去省局检验，省局做不出来就完蛋了

ceq518

算！不是做验证就能解决的吧！

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天蓝雪

开始觉得4楼说得对 只要别人不查你仪器 别人也不知道你方法怎么样
但是如果你还要送检的话 结合0512里面提到的 如果你流动相改变在色谱参数允许调整范围内，“调整后，系统适用性应符合要求，且色谱峰出峰顺序不变。若减小进样体积，应保证检测限和峰面积的重复性；若增加进样体积，应使分离度和线性关系仍满足要求。应评价色谱参数调整对分离和检测的影响，必要时对调整色谱参数后的方法进行确认。”，感觉最多就是做个方法确认，如果你能充分说明对检测结果不影响应该可以连确认都不用。

一只小肥罗

门门 发表于 2025-06-21 17:35
放二十年前，这就随便改就行了，题主的方式也行。
放当今，这样是重大变更妥妥滴！
但是，可以变通嘛，方法就设定15分钟（主峰10分钟，所以足够了），然后采用仪器方法的“后运行”设定，等于运行中啥也没改，就不算改了方法，只要你不说，反正没人懂，所以也没人管。

我们也这样

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一只小肥罗

哨子knn 发表于 2025-06-21 17:57
主要我是报生产，要过GMP，到时应该要抽样去省局检验，省局做不出来就完蛋了

你想多了，药检院的老师没那么傻的

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哨子knn

一只小肥罗 发表于 2025-6-23 10:16
你想多了，药检院的老师没那么傻的

主要我提交的方法不体现洗脱段的话，假设最后方法定了10min，药检所10min后再进一针发现有残留，不会觉得我方法有问题吗？还是说这个时候他们会自己增加洗脱呢？

门门

哨子knn 发表于 2025-6-21 17:57
主要我是报生产，要过GMP，到时应该要抽样去省局检验，省局做不出来就完蛋了

你们跟省所关系怎么样？
若是关系好，那就这么干，到时候跟省所实话实说就行。没事的。
这不算改变方法，这句话你别和GMP文学扯淡吹们说，你就仅和药检所说就没事。
说严重点儿，这玩意儿若是有人举报说这个有问题，这举报人都拿不到奖（内部举报人制度最近刚正式实施知道吧）！所以别担心。

直接依据没有，给你一个佐证，让你放心点儿， 通则0512高效液相色谱法 2025版药典 新写了个内容 “滞留体积”，这玩意儿用前运行或某些特殊手段（有些品牌仪器有的手段），即可搞定，符合药典要求，不算改方法。其实 这个事，比你这情况半斤八两，居然啥都不算，方法学确认的时候试一下就行。

暹j7ii0bkw

门门 发表于 2025-6-21 17:35
放二十年前，这就随便改就行了，题主的方式也行。
放当今，这样是重大变更妥妥滴！
但是，可以变通嘛，方 ...

变更了每一针的时间，重大变更！

门门

一只小肥罗 发表于 2025-6-23 10:16
你想多了，药检院的老师没那么傻的

对。
我在2023年总结过，
每年中检院的能力测试，
综合结果表明：
各省市药检所的水平
明显高于药企
原因至少有三：
1药检有系统的培训，下限很高；药企师傅传承是一代不如一代，下限极低。 当然，两者的上限差不多。
2药检所每天专注于理论知识，实验技能，接触先进科学技术容易（包括但不限于各种硬件设施）；药企 每天有至少一半的时间用于 GMP文学扯淡吹，甚至在过去很长一段时间里号称硬件不足可以软件补（品品多扯淡，现在这句终于是不说了）。
3 药检所仅对样品负责，正常实验即可，无需陷入各种扯皮；药企还要负责取样，结果还经常扯皮，本来因2就剩一半的时间了，还要再耗去四分之一。
13楼 若关系条件允许，那么干就行。

门门

我突然想起来个情况：你说的没洗脱完全的具体情况是？
有跟主峰峰面积 差不多大的峰？
还是仅是10分钟后面有一堆小峰？
这么说吧，这些小峰的每一个峰面积只要别高于主峰的1%，就没事，不理不睬都行，影响不了多少你的主峰含量。

416301116

50min的洗脱峰比较小的话，可以换个思路，降低进样量让它别出来，不影响主峰就好了

哨子knn

门门 发表于 2025-6-23 12:04
我突然想起来个情况：你说的没洗脱完全的具体情况是？
有跟主峰峰面积 差不多大的峰？
还是仅是10分钟后 ...

20分钟有个大峰，之后都是些不算大的峰，目前40min连续进样6针主峰峰面积无明显变化，打算先就按40min做个确认了

哨子knn

416301116 发表于 2025-6-23 13:24
50min的洗脱峰比较小的话，可以换个思路，降低进样量让它别出来，不影响主峰就好了

已经是从10μ降到5μ改善峰型了，只能说这方法年纪比我都大，哪哪都是问题

一只小肥罗

如果是你们建立的新方法，肯定会提出质疑的，检验方法通不过的，如果你们用药典标准方法检验中药材，例如用药典丹参药材的方法检测丹参含量，就不会说的，他们复核的时候会自己优化的。

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