E.coli发酵的蛋白产品

loxgirl

请教一下各位下面三个问题：
1、E.coli发酵表达的产品发酵罐需要在什么级别的洁净室里面，里面要设置哪些区域？具体有什么要求？比方说是否需要单独的种子间，单独的复苏培养操作间？种子间需要在洁净环境中吗？
2、菌株怎么管理，需要几级的种子库？菌株需要定期做测序验证吗？
3、不同批次发酵出来的纯化后的蛋白是否可以混合做成制剂？
多谢啦

药仙

发酵罐需要在一般区域就行，也可以在d级，纯蒸汽灭菌，种子接种投料要压差保护，防止细菌污染导致发酵失败。一般是三级种子库管理
种子库分为：原始种子库、主种子库和工作种子库。
所有的种子库建立的前提是严格的无菌操作和无菌意识。
原始种子库一般为实验室构建菌株时已经建立，需要对它们进行遗传稳定性分析，明确传代的次数。对遗传背景要有分析。还要分析蛋白表达量。
不同批次发酵出来的纯化后的蛋白是可以混合做成制剂原料，但是必须以总混量定。

loxgirl

发酵罐在普通区域怎么保证不被污染？投料的压差保护怎么做？在哪里有规定发酵罐可以在普通级别？望得到赐教，thanks

下棋找高手

1、发酵罐可以安置在D级区即可，必须有种子间、培养操作间、接种可以在层流下。
2、菌株肯定是在双人双锁管理，最好有QA人员，种子库三级就可以，菌株需要每年都要测序。
3、不同批次发酵出来的纯化后的蛋白（分批检验合格后）可以混合做成制剂。