色谱柱损坏

lk2B · 发表于 2015-10-21 21:30:22

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本帖最后由 lk2B 于 2015-10-21 21:43 编辑

大家好，请教各位大侠一个问题！希望能得到指点！现在的问题是，色谱柱被莫名其妙损坏，用两三次就出现主峰分叉的现象。而且明显能看到主峰越变越丑的过程，还伴随有压力增大的现象。色谱柱是一般的C8和C18的色谱柱。品牌有安杰伦，华谱。我们的流动相是缓冲盐和乙腈混合，有磷酸盐，乙酸钠等，缓冲盐浓度最高的有0.2m，比例最高有到75%。有的要加三乙胺有的不加，pH有4.4，3.5，8，9等各种。液相也有3台不同品牌的。也就是说各种检验方法不同流动相，各种样品，各种不同的液相仪器，不同的操作人员，各种品牌色谱柱，长柱短柱，均出现用两三次就损毁的现象。我们将色谱柱拆下后发现，是色谱柱塌陷。我们的检验方法是很成熟的方法，已经用了几年了！我们也换了三种超纯水，甚至还用了怡宝水，但是新色谱柱投入使用后还是4次就塌陷了，甲醇从MEDAR换到了霍尼韦尔，乙腈从百灵威换到了赛默飞，固体试剂也更换过瓶。但是仍旧出现，不知道什么东西把色谱柱搞塌陷了！如图，下面的是正常情况，中间过程就不看了，最后的结果就是上面的图！现在已经不知道从哪里查找原因了！甚是苦恼，跪求指点！

15656868265 · 发表于 2015-10-21 22:30:47

我想问你做是什么品种？是不是那堵了，造成压力过高，超出填料耐受压力，或者有什么物质把色谱柱填料溶解了啊

道路漫长黑暗 · 发表于 2015-10-21 22:31:03

你直接上甲醇水、乙腈水空跑看看柱子会不会塌，不塌的话不加样品直接跑你的流动相，如果塌了说明流动相不合适，没塌说明样品不合适，另外现在卖柱子的竞争激烈，你把样品给他一般都可以替你筛选合适的柱子。

syhorchid · 发表于 2015-10-21 23:05:07

上样量超载？

keychen · 发表于 2015-10-22 07:53:56

还有样品溶剂是啥，进样量是多少，色谱柱的后处理是啥？

攻城狮 · 发表于 2015-10-22 08:23:57

本帖最后由攻城狮于 2015-10-22 08:26 编辑

多色谱柱、多仪器、连续时段！少见，应该不是柱子仪器的问题，怀疑流动相、操作方法。
压力的变化怎样？如新柱子时压力多少？第二次多少？.......看有什么规律；
一些低级的错误不会犯吧？如清洗方法、过渡方法、流动相过滤、供试品过滤等；
是否有接保护柱？

实验室 · 发表于 2015-10-22 08:26:46

我记忆中色谱柱的大部分ph耐受度都是2-8，会不会有时候pH有点儿过。另外在低pH条件下，磷酸盐在乙腈溶液中溶解度较小，研究表明，当乙腈接近50%且磷酸盐达0.05M时会产生沉淀。经常造成柱子坏的可能多为方法问题吧，若是QC操作问题我想作为正规公司应该不可能，再就是样品的处理过程是不是不易溶解，有木有过滤？

lk2B · 发表于 2015-10-22 19:39:24

syhorchid 发表于 2015-10-21 23:05
上样量超载？

色谱柱的载样量怎么计算呢？我们就是250。4.6。5的色谱柱。碳8，碳18的都有。

lk2B · 发表于 2015-10-22 19:43:29

keychen 发表于 2015-10-22 07:53
还有样品溶剂是啥，进样量是多少，色谱柱的后处理是啥？

样品的溶剂都是流动相。我们的后处理程序都是冲10%甲醇水40分钟到1小时，冲甲醇40分钟到1小时左右。进样量有的10微升，有的20微升。最大就20微升了！

lk2B · 发表于 2015-10-22 20:04:57

攻城狮发表于 2015-10-22 08:23
多色谱柱、多仪器、连续时段！少见，应该不是柱子仪器的问题，怀疑流动相、操作方法。
压力的变化怎样？如 ...

昨天又报废一根柱子，用第四次。没有保护柱。流动相是。乙腈:0.02m乙酸铵:三乙胺=60:40:0.2。新柱冲甲醇和甲醇水一切正常，第一次第二次第三次压力和风形没有任何变化。昨天，冲甲醇，甲醇水和用流动相平衡色谱柱的时候都正常。开始进样溶剂的时候，压力开始波动，从几十到一百多来回波动。十几分钟后开始进样品，主峰八千多的峰面积分成了两个，一个七千多，一个几百的肩峰。我们立即将色谱柱拆来看，柱头处的填料已经不平，呈一个斜面状！柱尾处填料已经冲出！我们未采取任何措施将柱子上好，反冲，冲流动相，压力直线上升，到两百多巴后我们只能停了，再顺冲，压力同样高，在190巴左右处我们进了一针样品，峰形与第一次一样。昨天用的试剂是以前的，人是以前的，流动相现配，水用的怡宝，抽滤过滤超声一切正常！

lk2B · 发表于 2015-10-22 20:22:56

实验室发表于 2015-10-22 08:26
我记忆中色谱柱的大部分ph耐受度都是2-8，会不会有时候pH有点儿过。另外在低pH条件下，磷酸盐在乙腈溶液中 ...

关键是pH2_10的色谱柱，用来做流动相pH为3.5的样品，还是几次就毁了！抽滤用的津腾的滤膜，过滤样品用的是一次性的滤头！

lk2B · 发表于 2015-10-22 20:28:29

道路漫长黑暗发表于 2015-10-21 22:31
你直接上甲醇水、乙腈水空跑看看柱子会不会塌，不塌的话不加样品直接跑你的流动相，如果塌了说明流动相不合 ...

那要跑多久才能看出结果呢，

lk2B · 发表于 2015-10-22 20:29:52

15656868265 发表于 2015-10-21 22:30
我想问你做是什么品种？是不是那堵了，造成压力过高，超出填料耐受压力，或者有什么物质把色谱柱填料溶解了 ...

那有没有什么办法可以测定是否是我们的流动相或者样品将色谱柱的固定相溶解了呢？

lk2B · 发表于 2015-10-22 20:31:53

15656868265 发表于 2015-10-21 22:30
我想问你做是什么品种？是不是那堵了，造成压力过高，超出填料耐受压力，或者有什么物质把色谱柱填料溶解了 ...

化学原料药，哌秦奎诺酮类。

道路漫长黑暗 · 发表于 2015-10-22 21:01:35

lk2B 发表于 2015-10-22 20:28
那要跑多久才能看出结果呢，

按你这个破坏频率估计冲上两个小时就能有结果，找一个稳定产品做标记化合物，连续进样看理论板数的变化情况试试吧

keychen · 发表于 2015-10-23 08:13:18

lk2B 发表于 2015-10-22 19:43
样品的溶剂都是流动相。我们的后处理程序都是冲10%甲醇水40分钟到1小时，冲甲醇40分钟到1小时左右。进样 ...

建议更改后处理程序，别用那么高比例的水相冲洗，从流动相比例开始就行，高pH值流动相的后处理中，可以采用TFA的水相冲洗，还有，改为乙腈作为有机相，如果不觉得贵的话

实验室 · 发表于 2015-10-23 08:14:38

lk2B 发表于 2015-10-22 19:39
色谱柱的载样量怎么计算呢？我们就是250。4.6。5的色谱柱。碳8，碳18的都有。

是不是过载看初次检测是否出现平头峰

lk2B · 发表于 2015-10-23 20:26:09

实验室发表于 2015-10-23 08:14
是不是过载看初次检测是否出现平头峰

首次检测峰形很正常，没有平头，塔板数这些都正常！

lk2B · 发表于 2015-10-23 20:31:46

keychen 发表于 2015-10-23 08:13
建议更改后处理程序，别用那么高比例的水相冲洗，从流动相比例开始就行，高pH值流动相的后处理中，可以采 ...

含盐量高的不就是要用高水相的甲醇水或者乙腈水冲洗色谱柱吗？为什么建议不用甲醇呢？我们这段时间也发生了有的色谱柱冲甲醇压力很高，但冲乙腈压力就很正常的现象，连塌陷了的色谱柱都有这种现像，难道是我们的甲醇有问题？可是不会两个厂家的甲醇都有问题吧？

keychen · 发表于 2015-10-24 09:11:30

lk2B 发表于 2015-10-23 20:31
含盐量高的不就是要用高水相的甲醇水或者乙腈水冲洗色谱柱吗？为什么建议不用甲醇呢？我们这段时间也发生 ...

我不知道你们的色谱柱的具体型号（不是品牌），某些色谱柱是不太适用于高盐相的，还有一个没讨论到的原因，就是你们水相的配制和处理方式，是单独水相作为一个流路，还是手动混合成流动相。如果是前者，水相使用过程中脏了是很有可能的，尤其某一流路如果一直使用水相，那么从滤头到脱气机，都可能很脏了

[质量控制QC] 色谱柱损坏

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