有关湿热灭菌工艺验证 生物指示剂的问题

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各位专家大师，请教关于湿热灭菌工艺验证 生物指示剂的问题： 2015版药典规定湿热灭菌生物指示剂—嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC 7953的D值为1.5～3.0。其存活时间在4.5～14.0min，完全杀灭时间应在13.5～32.0min。 但是国内市售嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC 7953的D值标准一般均为1.3～1.9，存活时间≥4.5min，杀灭时间≤19min。 现在我公司需要进行灭菌工艺验证，进行生物指示剂挑战试验，若选择D值1.5～3.0的ATCC 7953指示剂，理论杀灭时间应在13.5min～32.0min，但是我公司的灭菌工艺为121℃、12min、保温阶段F0>12，不能完全排除灭菌后指示剂呈阳性的可能吧，该当如何？ 根据公式：F0=（LgN-LgN0）× D121℃                      =（Lg10^6 –Lg10^-6）×1.0                      =（6+6）×1.0                      =12 也就是说，过度杀灭法要求F0大于12，默认的极限条件为污染菌D121℃=1，初始染菌量10的6次方，目标降低到10的-6次方，可以达到无菌保证水平SAL<10的-6次方。那么，选择指示剂的D121℃只要是大于1，比如1.4，存活时间约为4.5min，杀灭时间≤12min，灭菌后指示剂呈阴性，这样不可以证明灭菌工艺的无菌保证水平小于百万分之一吗？

song_85122

根据灭菌工艺选择合适D值。

如果D值太大，有可能出现灭菌异常。但是也可以根据实际的下降对数来确认生物指示剂的F0值，那样比较麻烦。

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song_85122 发表于 2018-2-8 14:08
根据灭菌工艺选择合适D值。

如果D值太大，有可能出现灭菌异常。但是也可以根据实际的下降对数来确认生物 ...

现在的问题就是121℃、12min、保温阶段F0>12, 进行生物指示剂挑战试验 究竟该选择D值为多少的指示剂？

入不了门者

12分钟太短了吧？

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入不了门者 发表于 2018-2-8 14:48
12分钟太短了吧？

保温阶段>121℃，12min，完全可以保证F0>12啊。

入不了门者

1156798257 发表于 2018-2-8 14:51
保温阶段>121℃，12min，完全可以保证F0>12啊。

一般不都是15min起步吗，很少看到12分钟的

1156798257

即使是121℃、15min灭菌，采用D值1.5～3.0的指示剂，也未必能保证灭菌后阴性，因为该指示剂完全杀灭时间应在13.5～32.0min，就算把升温时间和降温时间累计的F0值也算在内，估计还不能100%保证结果阴性。所以不解，为何药典定的指示剂D值这么高，而市售指示剂D值仅为1.3～1.9.

乾乾君子

https://www.ouryao.com/thread-403701-1-1.html供参考

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乾乾君子 发表于 2018-2-8 15:23
https://www.ouryao.com/thread-403701-1-1.html供参考

嗯，药典上也规定了，湿热灭菌常用指示剂基本上就是嗜热脂肪芽孢杆菌和生饱梭杆菌，但是D值都不太合适，所以很费解。

zj3801033

这个是存在一个理论计算值和你实际执行过程中的误差，在理论计算中会采用D值，而实际操作中，为了降低风险，基本上会在理论基础上时间有所延长或温度发生变化，比如：灭菌条件有121℃，20min、30min等。

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zj3801033 发表于 2018-2-8 16:31
这个是存在一个理论计算值和你实际执行过程中的误差，在理论计算中会采用D值，而实际操作中，为了降低风险 ...

我理解你这种说法，那这样的话，121℃、15min灭菌程序就不能用药典上所说的D值为1.5～3.0的指示剂了，因为最长可能需要达到32min的杀灭时间，15min灭菌时间是存在灭菌后阳性的可能。除非是升温时间和降温时间足够长，累计贡献各自阶段的F0值，最终达到杀灭效果。

其实，121℃灭菌工艺要达到F0值>12,恒温阶段保持12～15min完全可以做到，不用考虑升温时间和降温时间所做的贡献。

吃鸡啊

参考学习学习

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song_85122 发表于 2018-2-8 14:08
根据灭菌工艺选择合适D值。

如果D值太大，有可能出现灭菌异常。但是也可以根据实际的下降对数来确认生物 ...

请教一下：如何确定指示剂的F0值？

指示剂ATCC7953 假设采用DBi=1.5，N=10^6，腔室温度121℃、恒温阶段12min，灭菌后结果阴性，单从检验结果来说只能认为是N0=10^-1吧？

song_85122

1156798257 发表于 2018-2-9 09:52
请教一下：如何确定指示剂的F0值？

指示剂ATCC7953 假设采用DBi=1.5，N=10^6，腔室温度121℃、恒温阶 ...

简单的话确认厂家的COA

也可以自己检测D值

song_85122

1156798257 发表于 2018-2-9 09:52
请教一下：如何确定指示剂的F0值？

指示剂ATCC7953 假设采用DBi=1.5，N=10^6，腔室温度121℃、恒温阶 ...

单从检验结果上计算，N=10的6次方，阴性N=0，故下降6个对数级

故BI的F0=6×1.5=9

1156798257

song_85122 发表于 2018-2-9 10:18
简单的话确认厂家的COA

也可以自己检测D值

那假如厂家的COA D=1.5，N=10^6，Z=10℃，survival time≥4.5min，kill time≤12min。121℃、12min 结果阴性。

请问如何确定BI的真实F0？

预知子

PDA技术报告里有

yuqing3257

正有这部分的需要，到底如何根据灭菌工艺进行选择生物指示剂呢？

1156798257

yuqing3257 发表于 2020-11-5 16:44
正有这部分的需要，到底如何根据灭菌工艺进行选择生物指示剂呢？

请到CDE下载2020年《化学药品注射剂灭菌无菌工艺研究及验证指导原则》学习。