高等级生物安全实验室借助空调内循环灭菌案例

蒲公英小可爱

案例背景

高等级生物安全实验室装有特殊的空调系统，进入的空气温度、湿度与洁净度都需要进行调节，进出空气都要经过过滤效率为99.99%的HEPA过滤器，并保证实验室内空气的换气次数达到国家标准要求。实验室采用定向负压系统，其核心区的压强达到负100帕以上，实验室内的空气只能通过排风系统排出，而不会向外围空间泄漏，高等级的生物安全实验室排气系统要求经过双级高效过滤器，以保护实验室外的空气不受污染。

复杂的空调系统设计以及较高的病菌污染风险，向高效过滤器的灭菌发起了更高级的挑战。无论是H13还是H14级别的高效过滤器，对0.3 μm粒子过滤效率都能达到99.99%。有相关报道，”0~10 μm”过氧化氢干雾技术以及英国某进口品牌的微冷凝技术，均无法完成对高效过滤器的灭菌，Steris VHP 在该领域则表现出了独特的优势，已有相关成功案例的报道。

案例详情

长春某研究所一个典型的三级生物安全实验室，设置袋进袋出（简称“BIBO”）系统作为第二道高效过滤器，室内排风口处设有第一道高效过滤器。此前Steris VHP已成功对哈尔滨某研究所的高等级生物安全实验室双级高效BIBO系统进行灭菌，并顺利通过具备相关资质的第三方检测机构的检测。此次在该P3实验室进行的灭菌，主要是希望借助空调内循环，实现对实验室以及送风高效过滤器、排风高效过滤器的整体灭菌。如图1所示，灭菌时关闭进风端“FRESH AIR VALVE”和排风端“EXHAUST AIR VALVE”，打开“CIRCULATE VALVE 1”和“CIRCULATE VALUE 2”，同时借助备用风机“CIRCULATE FAN”提供动力，实现房间内循环。

灭菌过程与结果

指示剂共布置11组，每组包含两片生物指示剂（Steris NA333，嗜热脂肪芽孢杆菌，ATCC12980，数量106/片和Mesalab HMV091, 嗜热脂肪芽孢杆菌，ATCC12980，数量106/片）和1片化学指示剂（Steris PCC051）。如图2所示，送风、排风口处各1组。其它9组按布点原则进行布置，包括距离设备最远点、房间角落、设备底部和后部、人员活动密集区等。过氧化氢蒸汽发生器在实验室内，选择6 log灭菌程序，借助空调系统实现房间内循环灭菌。

经过灭菌后，灭菌区域内各房间、角落、设备表面均达到有效灭菌浓度，灭菌阶段过氧化氢浓度维持在50～479 ppm。采用较长的灭菌时间2小时40分钟，保证了送风排风口处高效过滤器的有效灭菌。化学指示剂变色情况如图3所示，可发现指示剂已完全变色。将实验组生物指示剂和阳性对照生物指示剂接种到TSB中培养，7日后观察培养结果，所有实验组和阴性对照组均无微生物生长，阳性对照组培养基有微生物生长，可证明用于挑战的指示剂均通过挑战，灭菌合格。

（未完待续。。。）

syhorchid

谢谢分享，期待继续。