纯化水微生物限度取10ml，还加稀释液吗

小铁犇

药典规定，纯化水只需要测大于1毫升就行，我取10毫升直接过膜（之前膜已经用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿并灭菌），再用50毫升pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗膜，为什么要冲洗膜呢；
有的方法是纯化水加无菌水稀释一下取10毫升测定，这个是为什么呢？

james175cm

纯化水微生物限度是取本品不少于1ml，标准是1ml供试品中需氧菌总数不得过100cfu。实际操作过程中取1ml供试品加入100ml灭菌的缓冲液中，过滤，取滤膜菌面朝上贴于R2A培养基。若没有长菌，报告小于1就行了，取10ml过滤的用意是什么呢？长多了还没办法数。至于冲洗是因为培养的是过滤膜，为了把管路和过滤器壁上的微生物集中到膜上。

凉风

过滤量太小，所以要冲洗或稀释

李会玲

请问，微孔滤膜怎么灭菌

李会玲

缓冲液和冲洗液都是一种溶液么，公司里有无菌氯化钠，也可以用吧

小铁犇

李会玲 发表于 2020-11-19 13:55
请问，微孔滤膜怎么灭菌

微孔滤膜跟着抽滤那个头一块灭菌，按厂家说的做的

来自苹果APP客户端

小铁犇

李会玲 发表于 2020-11-19 14:01
缓冲液和冲洗液都是一种溶液么，公司里有无菌氯化钠，也可以用吧

我看也有用无菌生理盐水作为冲洗液的

来自苹果APP客户端

李会玲

jiazhang33 发表于 2020-11-19 14:08
微孔滤膜跟着抽滤那个头一块灭菌，按厂家说的做的

用的是三联滤杯，买的上海新亚微孔滤膜散装的，找不到厂家，三联滤杯那么长，直接放高压锅么？

小铁犇

james175cm 发表于 2020-11-19 14:08
纯化水微生物限度是取本品不少于1ml，标准是1ml供试品中需氧菌总数不得过100cfu。实际操作过程中取1ml供试品加入100ml灭菌的缓冲液中，过滤，取滤膜菌面朝上贴于R2A培养基。若没有长菌，报告小于1就行了，取10ml过滤的用意是什么呢？长多了还没办法数。至于冲洗是因为培养的是过滤膜，为了把管路和过滤器壁上的微生物集中到膜上。

看完您的回复我明白点了，我取10毫升做出来这样的，肯定要重新换方法做实验了，但是这个看膜哪面呢？看与培养基贴合那面（也就是从平皿底部看）还是看背对培养基那面（从平皿上盖）看？

来自苹果APP客户端

小铁犇

李会玲 发表于 2020-11-19 14:13
用的是三联滤杯，买的上海新亚微孔滤膜散装的，找不到厂家，三联滤杯那么长，直接放高压锅么？

我用的这种很短，厂家说121度湿热灭菌

来自苹果APP客户端

李会玲

“取纯化水20ml，用薄膜过滤法过滤，减压抽干，取出滤膜，将滤膜放入制备好的R2A培养基平板上，在30-35度培养不少于五天，计数。
阴性对照：取20ml已灭菌的纯化水按供试品同法处理，作为阴性对照。”
这是之前工作的小姐姐留下来的步骤，我有好多疑问
1.三联滤杯配了高温枪，可以灭菌，但是新亚的微孔滤膜怎么灭菌
2.步骤里没说缓冲液，冲洗液的事，我在网上查了可能需要，但是具体怎么做，多少量还是不知道
3.三联滤杯的杯子是敞口的，我在倒的过程不是又接触了空气么，那不就可能染菌了么
4.我看楼主是10ml，都不可计数，那我20ml，没冲洗，没缓冲，就更不计数了。
5.阴性对照里，灭菌的纯化水，那我从车间里取完的纯化水该怎么灭菌，高压灭菌锅么
现在实验室就我一个实习生，找不到前辈请教，谢谢各位帮帮忙。

smile3

当然是看正面啊

james175cm

jiazhang33 发表于 2020-11-19 14:16
看完您的回复我明白点了，我取10毫升做出来这样的，肯定要重新换方法做实验了，但是这个看膜哪面呢？看与 ...

是菌面朝上贴在培养基上，当然是长在膜表面，微生物又不会跑到膜背面去，不要以为没有和培养基接触，之所以叫膜微生物是可以通过膜吸收营养的。我发现你好可爱。
你这个培养的时间挺长了吧，已经连成片了，不好计数了。初略数了下有80以上了，按我说的方法做就好了。

小铁犇

james175cm 发表于 2020-11-19 16:46
是菌面朝上贴在培养基上，当然是长在膜表面，微生物又不会跑到膜背面去，不要以为没有和培养基接触，之所 ...

好的，专业人士能数到80以上，我看不出来什么

james175cm

李会玲 发表于 2020-11-19 14:13
用的是三联滤杯，买的上海新亚微孔滤膜散装的，找不到厂家，三联滤杯那么长，直接放高压锅么？

微生物限度为什么要用三联滤杯，介绍你看一下温州维科的微生物限度仪，包括反复使用集菌培养器，滤膜，如何灭菌等等，厂家还是算比较专业的。

死库水

用过一次性集菌培养器，挺好用的，也买过抽率装置，几万一台，一次做6个，基本全自动。还看过食品还是药品法规官网里的直接灼烧灭菌。然后，按药品要求是用缓冲液，但我上学时就是无菌生理盐水，保证细胞膜不破就行

果然12

主要看以下要点是如何做的，还是需要准也机构培训一下

Joyce1234

李会玲 发表于 2020-11-19 13:55
请问，微孔滤膜怎么灭菌

滤头和过滤膜湿热灭菌

Joyce1234

jiazhang33 发表于 2020-11-19 14:16
看完您的回复我明白点了，我取10毫升做出来这样的，肯定要重新换方法做实验了，但是这个看膜哪面呢？看与 ...

看正面进行计数，反正看到啥

zyhybl

李会玲 发表于 2020-11-19 13:55
请问，微孔滤膜怎么灭菌

可以买已灭菌的滤膜，用起来方便