微生物

Gypsophilamad

为什么做某些样品的微生物计数方法学时，采用过膜方法做，枯草芽孢杆菌会长糊，不利于计数呢？为啥会出现这种情况啊？求大佬指点

深夜哭的舔狗

不太会帮你叫鼠鼠

机智鼠

枯草芽孢杆菌在液体培养基中生长时，出于对氧气的需求，会趋于表面生长，形成菌膜，以增加与空气的接触面积。当采用过膜方法进行微生物计数时，枯草芽孢杆菌可能会在滤膜表面大量繁殖并聚集在一起，形成类似糊状的物质，这不利于对其准确计数。

此外，枯草芽孢杆菌能够形成复杂的生物被膜，这种生物被膜结构可能使其在滤膜上更容易聚集和附着，进一步增加了计数的难度。

总之，枯草芽孢杆菌的特性导致其在过膜过程中容易出现长糊现象，从而影响计数的准确性。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

xbzhang

其实主要原因是过膜后，滤膜是湿性的，水分较多，枯草的菌落容易蔓延，加上水分多，蔓延就更严重了，是否可以适当的晾干下，来缓解这个问题

wzzz2008

两个可能的原因：
1、菌太多了，需要再稀释。
2、如楼上所说，太湿了，可以抽滤的时候稍微多抽一下。
具体啥原因需要自己再排除下

股痴

微生物特性方面

生长速度与生物量：枯草芽孢杆菌生长速度相对较快，在适宜条件下，其细胞繁殖迅速。当采用过膜法将含有枯草芽孢杆菌的样品过滤到滤膜上进行培养时，由于滤膜提供了相对集中的营养环境，细菌大量繁殖，短时间内就会形成较高的生物量。过多的菌体紧密聚集在一起，就容易出现长糊的情况，使得单个菌落难以区分，从而不利于计数。

芽孢特性：枯草芽孢杆菌能够形成芽孢，芽孢对环境有较强的抵抗力。在样品处理和培养过程中，芽孢可能会在滤膜上萌发并生长。部分芽孢可能处于不同的萌发阶段，导致在滤膜上的生长情况较为复杂，增加了菌体分布的不均匀性。大量芽孢同时萌发后形成的菌体相互交织，进一步造成长糊现象，干扰准确计数。

实验操作与条件方面

样品浓度：如果样品中枯草芽孢杆菌的初始浓度过高，过膜后滤膜上的细菌数量过多，它们在有限的空间内迅速生长，很快就会相互融合，形成一片模糊的菌苔，难以分辨单个菌落。例如，未对原始样品进行适当稀释，就直接进行过膜操作，就容易出现这种情况。

培养基成分与特性：培养基的成分和性质对枯草芽孢杆菌的生长形态有影响。若培养基中营养成分过于丰富，可能会促进枯草芽孢杆菌的过度生长，使得菌落生长过大且相互连接。另外，培养基的凝固性、含水量等物理性质也很关键。如果培养基凝固不充分，在培养过程中可能会出现轻微流动，导致菌体在滤膜上的分布改变，增加菌落相互融合的几率，进而长糊。

培养条件：培养温度、湿度和时间等条件控制不当也可能引发长糊。枯草芽孢杆菌的最适生长温度一般在30 - 37℃，若培养温度偏高，其生长速度会进一步加快，更容易出现菌落融合。培养环境湿度过高，可能导致滤膜表面过于潮湿，有利于细菌的扩散和相互接触，促使长糊现象发生。而培养时间过长，细菌持续生长繁殖，菌落也会不断扩大并相互连接。

滤膜相关因素

滤膜孔径：滤膜孔径大小对细菌的截留和生长有影响。如果滤膜孔径过大，虽然能有效截留枯草芽孢杆菌，但细菌在滤膜上有相对较大的活动空间，在生长过程中更容易迁移并相互聚集，导致长糊。相反，孔径过小可能影响细菌获得营养物质，造成细菌生长状态不佳，但一般不会直接导致长糊。

滤膜材质：不同材质的滤膜表面性质不同，可能影响细菌的附着和生长。某些滤膜材质可能会促进枯草芽孢杆菌的附着和聚集，使得菌体在滤膜上分布不均匀，生长过程中容易形成大片的菌苔，不利于计数。例如，滤膜表面的电荷特性可能影响细菌与滤膜的相互作用，进而影响细菌的分布和生长形态。

咒逐

要么菌多了，要么没冲开。个人经验枯草芽孢杆菌还算好的，铜绿假单胞菌那玩意蔓延才厉害。

改善方法么，多注意一下菌量。
加菌液可以提前一点，别都抽干了再加，尽量均匀铺散在膜上。
还有就是多天计数，实在容易出问题的膜第1天、第2天、第3天都计数，取糊之前的最大值即可，前期小很多的借助一下2-5X的放大镜。

海上森林一只猫

我们也是不好计数

Gypsophilamad

海上森林一只猫 发表于 2025-2-8 09:06
我们也是不好计数

那如何解决这种情况啊。第一天就糊了，根本不好计数

Gypsophilamad

咒逐 发表于 2025-2-8 08:43
要么菌多了，要么没冲开。个人经验枯草芽孢杆菌还算好的，铜绿假单胞菌那玩意蔓延才厉害。

改善方法么， ...

第一天看就已经长成菌苔了

咒逐

Gypsophilamad 发表于 2025-2-8 11:27
第一天看就已经长成菌苔了

方便上个图么？直接在楼里发，发完回复我这楼就行，

浮光

股痴 发表于 2025-2-8 08:38
微生物特性方面

生长速度与生物量：枯草芽孢杆菌生长速度相对较快，在适宜条件下，其细胞繁殖迅速。当 ...

厉害，学习了