脂质体测细菌内毒素方法

crush1234

目前遇到脂质体测内毒素，其主要成分是磷脂和胆固醇具有亲水性和疏水性两种性质，且带正电荷，会吸附内毒素，尝试使用内毒素分散剂稀释至一定倍数，发现有增强作用。目前想用超声的方法，破坏脂质结构，分散内毒素，各位大神有没有更好的建议

鬼使神差

以下是一些可以考虑的方法来处理脂质体测内毒素问题：

化学处理方法

添加表面活性剂：选择合适的非离子型表面活性剂，如吐温 - 80等。这些表面活性剂能够包裹脂质体和内毒素，阻止它们之间的吸附作用，并且有助于将内毒素分散在溶液中。不过需要注意的是，表面活性剂本身可能会对检测体系产生一定的干扰，所以要先进行预实验确定合适的浓度范围。
改变缓冲液成分：尝试不同的缓冲液，例如含有乙二胺四乙酸（EDTA）的缓冲液。EDTA可以螯合一些金属离子，而金属离子有时会促进脂质体和内毒素之间的相互作用。通过螯合金属离子，可能会减少吸附，从而使内毒素更好地分散。

物理处理方法

反复冻融循环：除了超声，反复冻融也是一种破坏脂质体结构的物理方法。将样品在低温（如 - 80℃）和室温之间反复循环多次，使脂质体由于冰晶的形成和融化而破裂，释放内毒素。这种方法相对温和，不会像超声那样可能产生局部过热等问题。
高压均质处理：在适当的压力下，使样品通过狭小的通道，利用剪切力和压力变化来破坏脂质体结构，从而使内毒素分散。在操作过程中要注意压力和循环次数的优化，避免过度处理导致样品性质改变。

xqliu

换一种检查方法吧

ALPACA

### 化学处理方法
- **使用表面活性剂**
    - 选择合适的表面活性剂来处理脂质体。例如，非离子型表面活性剂如聚山梨酯 - 80（Tween - 80）。它可以通过与脂质体的磷脂双分子层相互作用，在一定程度上减少脂质体对内毒素的吸附，并且有助于将内毒素从脂质体表面分散开来。在使用时，需要进行不同浓度的摸索实验，确定合适的添加量，避免对后续内毒素检测产生干扰。
    - 胆汁盐类表面活性剂如牛磺胆酸钠也可以考虑。胆汁盐能够与脂质体相互作用，改变脂质体的表面性质，使内毒素更容易从脂质体上分离。不过，胆汁盐可能会对某些内毒素检测方法产生一定的影响，需要谨慎评估其适用性。
- **改变pH值**
    - 通过调整溶液的pH值来影响脂质体和内毒素之间的相互作用。一般来说，在酸性或碱性条件下，脂质体和内毒素的电荷分布以及分子构象可能会发生变化。例如，在较低的pH值下，磷脂的质子化程度增加，可能会减弱脂质体与内毒素之间的静电吸附作用。但需要注意的是，极端的pH值可能会导致脂质体结构的破坏或者内毒素的失活，因此需要寻找一个合适的pH范围进行实验，并且要考虑所选内毒素检测方法对pH值的耐受性。

### 物理处理方法
- **加热处理**
    - 适当的温度可以使脂质体的流动性增加，从而有可能使吸附在内的内毒素更容易分散。可以在一定温度范围内（如40 - 60℃）对含有脂质体和内毒素的样品进行加热处理，时间控制在数分钟到数十分钟之间。不过，过高的温度会导致脂质体融合或者破裂，内毒素也可能会发生变性，所以需要通过实验来优化加热温度和时间参数。
- **高压均质处理**
    - 高压均质技术可以使脂质体受到高剪切力和压力的作用，从而使脂质体的粒径减小并且结构发生变化。这种处理可能会破坏脂质体与内毒素之间的吸附平衡，使内毒素分散到溶液中。在操作过程中，需要根据脂质体的性质和内毒素的稳定性来调整均质压力和次数，例如，压力可以从50 - 150MPa开始尝试，次数可以在1 - 5次之间进行摸索。

### 组合方法
- 将上述的物理和化学方法进行组合使用可能会取得更好的效果。例如，先使用表面活性剂处理脂质体，然后进行超声处理或者加热处理。或者先通过调节pH值改变脂质体和内毒素之间的相互作用，再用高压均质的方法进一步分散内毒素。在使用组合方法时，需要注意每种方法之间的相互影响以及对最终内毒素检测结果的综合影响，通过设计合理的实验方案来优化处理条件。

crush1234

鬼使神差 发表于 2024-11-27 18:47
以下是一些可以考虑的方法来处理脂质体测内毒素问题：

化学处理方法

非常感谢 打算先用吐温80来处理，有个疑问是吐温80本身内毒素怎么排除，肯定也要考虑他带来的影响，单独做个内毒素检查，证明他本身不会干扰反应和携带的内毒素量很少

crush1234

ALPACA 发表于 2024-11-28 09:24
### 化学处理方法
- **使用表面活性剂**
    - 选择合适的表面活性剂来处理脂质体。例如，非离子型表面 ...

打算用吐温80试试，但是他本身所带的内毒素量该怎么排除

微信rrqqkg99

没记错的话吐温应该是16倍以上就可以