枸橼酸三乙酯有关物质项目检测对照品溶液峰面积总是不稳定且低于理论值

1111rac

方法：气相色谱法（通则0521）。

- 色谱条件：

- 色谱柱：35%苯基-65%甲基聚硅氧烷毛细管柱（或极性相近）。

- 柱温程序：起始温度170℃维持18分钟，以20℃/min升至230℃维持10分钟，再以100℃/min升至298℃维持6分钟。

- 进样口温度300℃，检测器温度320℃。

- 溶液制备：

- 供试品溶液：精密称取本品，加N,N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至30mg/ml。

- 对照溶液：精密量取供试品溶液1ml，稀释至100ml（0.2%浓度）。

- 系统适用性溶液：含枸橼酸三乙酯与乙酰枸橼酸三乙酯各30mg/ml，验证分离度（两主峰分离度应符合要求）。

- 杂质限度：单个杂质峰面积不得大于对照溶液的0.2倍（0.2%），总杂质不得大于对照溶液的0.5倍（0.5%）。
检测使用的是安捷伦DB-35ms色谱柱，分流比20:1
我们在实际检测中对照品溶液峰面积总是低于理论值，即小于供试品溶液1ml稀释100倍之后的峰面积，差距较大。且每次序列走出来的两者比值不够稳定，差距较大导致杂质结果不稳定。但是每次进样前因为考虑残留问题都会进行仪器清洁、更换衬管、截取色谱柱这些，所以想不明白哪里出现了问题。

机智鼠

大，导致杂质限度判断困难。

回复：

根据您提供的信息，关于枸橼酸三乙酯的有关物质检测中对照品溶液峰面积不稳定且低于理论值的问题，可能的原因有以下几点：

1. **对照品溶液制备问题**：确保对照品溶液的制备过程准确无误，包括精密称量、溶解和稀释步骤。任何操作误差都可能导致浓度偏差，从而影响峰面积。

2. **色谱柱性能**：虽然使用了指定的色谱柱，但色谱柱的性能可能会随时间变化而降低，如固定相流失、柱效下降等。建议定期检查和维护色谱柱，必要时更换新柱。

3. **系统适用性测试**：系统适用性溶液用于验证色谱系统的分离能力。如果系统适用性测试中的两主峰分离度不符合要求，可能需要调整色谱条件或更换色谱柱。

4. **分流比设置**：分流比设置为20:1，这意味着只有5%的样品进入检测器。如果分流比设置不当，可能会导致峰面积不准确。建议检查并优化分流比设置。

5. **仪器校准**：确保气相色谱仪已经过适当的校准，以保证检测结果的准确性。

6. **溶剂纯度**：使用的N,N-二甲基甲酰胺和其他溶剂应为高纯度，以避免引入额外的杂质。

7. **环境因素**：实验室环境温度、湿度等因素也可能影响检测结果。保持实验室环境稳定有助于提高检测的重复性和准确性。

8. **分析方法验证**：进行全面的方法验证，包括专属性、线性范围、检测限、定量限、精密度、准确度等参数，以确保分析方法的可靠性。

参考法规或指南条款：
- 中国药典（CP）相关章节
- 国家药品监督管理局发布的《药品生产质量管理规范》（GMP）
- 国际标准化组织（ISO）相关标准

建议按照上述提示逐一排查可能的问题，并进行相应的调整和优化。如果问题依然存在，建议联系仪器供应商或寻求其他专业人士的帮助。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

18186386804

需要换一家对照品吗？可以联系我哦 18186386804

416301116

是中国药典方法吧，我们做过没有什么问题，如果是峰面积异常的话，考虑还是进样系统有问题概率大一些，进样针的规格是否合适，是手动进样还是自动进样，抽样的时候不能有气泡，可以在进样过程中观察一下，也可以改变进样模式，用三明治进样法，进样的精度会更高一些。

门门

把自动进样 针 换根新的，进样口隔垫换个新的，螺母不要太紧也不要太松，找个经验丰富的人好好拧一下。
分流比，再试试30：1， 10：1，看看哪种效果更好。
你的问题是它不成100倍的关系，差距挺大！
那另外，跟含量测定里的3mg/ml，对比一下，是10倍关系吗？

再说个跟问题没有关联的事情，“再以100℃/min升至298℃维持6分钟”，气相色谱仪真的不报警吗？
我是安捷伦7890，这个地方我改成了再以30℃/min升至298℃维持6分钟；设成100的情况是，安捷伦7890不是报警而是直接罢工了，8890据说能承受住。

门门

门门 发表于 2025-3-24 16:09
把自动进样 针 换根新的，进样口隔垫换个新的，螺母不要太紧也不要太松，找个经验丰富的人好好拧一下。
分 ...

还有衬管的选择也很重要，对这个试验应该也有影响。
我是运气好，一次就成功了。就是分流状态的影响，跑气情况不一致导致，
分流比，隔垫，衬管，进样速度，这些都会影响。

1111rac

416301116 发表于 2025-3-24 15:23
是中国药典方法吧，我们做过没有什么问题，如果是峰面积异常的话，考虑还是进样系统有问题概率大一些，进样 ...

我们是用岛津GC2010的自动进样，方便问一下，进样之前的洗针会出现一点气泡但是到进样的时候气泡就没有了，但是确实不是每次进针都观察，方便问一下这个三明治进样是怎么回事吗，是有什么模式设置吗

1111rac

门门 发表于 2025-3-24 16:09
把自动进样 针 换根新的，进样口隔垫换个新的，螺母不要太紧也不要太松，找个经验丰富的人好好拧一下。
分 ...

分流状态试过10:1但是好像不太行，30:没试过，我再看看。我们用的是岛津GC2010，仪器没有报过错，然后安捷伦7890B也试过这个方法，也没有报过错，就是结果比岛津差很多，后来就没有用过安捷伦做这个了。进样隔垫、针之类的也都换过，也换人做过，但是做出来的结果都不太好，而且不稳定。请问你们残留严重吗，我们清洁一次仪器走一个完整的序列，后面再走序列结果都会变高，峰面积会增大，会有这样的问题吗

门门

1111rac 发表于 2025-3-24 17:51
分流状态试过10:1但是好像不太行，30:没试过，我再看看。我们用的是岛津GC2010，仪器没有报过错，然后安 ...

没有遇到这样的问题，我用的安捷伦7890，分流比也是20：1。
只遇到了100℃/min柱温箱做不到，仪器直接罢工了。别的一切顺利

门门

1111rac 发表于 2025-3-24 17:51
分流状态试过10:1但是好像不太行，30:没试过，我再看看。我们用的是岛津GC2010，仪器没有报过错，然后安 ...

看看是不是检测器里污染了，清洗一下FID喷嘴吧

1111rac

门门 发表于 2025-3-24 18:24
看看是不是检测器里污染了，清洗一下FID喷嘴吧

好的吧我再试试，那个可以再问一下你们使用的N,N-二甲基甲酰胺和枸橼酸三乙酯都是什么牌子的吗

门门

1111rac 发表于 2025-3-24 20:39
好的吧我再试试，那个可以再问一下你们使用的N,N-二甲基甲酰胺和枸橼酸三乙酯都是什么牌子的吗

二甲基甲酰胺用的默克的色谱纯，
枸橼酸三乙酯对照品用的中检院对照品

416301116

1111rac 发表于 2025-3-24 17:44
我们是用岛津GC2010的自动进样，方便问一下，进样之前的洗针会出现一点气泡但是到进样的时候气泡就没有了 ...

三明治进样法是可以在进样模式中设置，具体软件可以联系工程师咨询，原理就是先抽去一段空气，再抽样，再抽取一段空气后进样，可以提高进样的精度

1111rac

门门 发表于 2025-3-25 07:57
二甲基甲酰胺用的默克的色谱纯，
枸橼酸三乙酯对照品用的中检院对照品

那我们是用的一样的，好的谢谢啊

cwsun@163.com